《分子生物学》-8.2真核生物RNA聚合酶 Ⅱ转录的调控 及mRNA的加工（中大生科院）.docxVIP

8.2真核生物RNAPⅡ转录的调控及mRNA的加工

mRNA的加工

前述

断裂基因(splitgenes)

真核生物的基因是断裂的

基因中存在内含子

取RNA与其基因的母本DNA进行杂交，电镜观察

内含子是转录的

证明：R-loop实验,β球蛋白

a.Beta球蛋白mRNA前体与DNA杂交

b.Beta球蛋白成熟mRNA与DNA杂交

IntronsExons

外显子

在成熟RNA中保留下来的任何序列片段，无论这些序列是否为编码序列（mRNA非编码区、rRNA、tRNA、ncRNA）

mRNA外显子的非编码区包括mRNA的5’非翻译区（5’UTR）及3’非翻译区（3’UTR）

有很多RNA终产物没有编码区，这些RNA成为非编码RNA(non-codingRNA)。如：长非编码RNA(lncRNA)H19、Xist

真核生物大多数mRNA基因是断裂基因(部分组蛋白编码基因除外)

不少tRNA基因也是断裂基因，但内含子较小（10bp左右），且只有1个

一些rRNA基因也是断裂基因

线粒体和叶绿体中也有断裂基因

部分真核生物病毒基因也是断裂基因

人类外显子的平均长度约为145bp

内含子数目变化大（0-362个）

内含子长度变化大（10bp-800kb）

内含子长度一般比外显子大

内含子是进化的重要模块

Q：RNA是如何进行加工的？

mRNA加帽(Capping)

帽子结构

m7G(7-甲基化鸟苷，5’-5’三磷酸键）

3种主要的cap

帽子合成机制

甲基的来源修饰酶

mRNA剪接(Splicing)

切除内含子，将外显子连在一起

剪接信号（splicingsignals）

。

剪接信号（splicingsignals）及调控蛋白

Splicingenhancer:ESE(外显子剪接增强子)，ISE(内含子剪接增强子)

Splicingsilencer:ESS(外显子剪接沉默子)，ISE(内含子剪接沉默子)

Trans-actingsplicingfactors：SRproteins（促进剪接）hnRNPs（抑制剪接）

RNA剪接的过程和机制

内含子剪接的类型

剪接体剪接(细胞核mRNA)

剪接体介导的细胞核pre-mRNA剪接

剪接体（spliceosome）

细胞核pre-mRNA的剪接由剪接体完成。

剪接体包含5种snRNA(smallnuclearRNA)和150种蛋白，沉降系数为40S(酵母)-60S(人)，与核糖体大小相仿。

snRNAs(smallnuclearRNA)

snRNAs的序列和二级结构

哺乳动物中长度约为100-215个核苷酸，由于含U丰富，因此常被称为U-RNA，如U1~U7。

snRNA只存在于细胞核中，其中U3存在于核仁中，与核仁内28SrRNA的成熟有关，其他6种存在于核质里，参与剪接。U7snRNA帮助组蛋白mRNA前体加工。

U6snRNA会在细胞核内与蛋白质组合成U6snRNP（不出核），而其他snRNA则会先被运输到细胞质中，在细胞质中与其他蛋白质组成snRNPs，然后再运输到细胞核内。

snRNP中的snRNAs用于识别剪接信号

snRNA识别信号及位点

剪接体剪接的机制及每种snRNP的作用是什么？

分支中间体（Branchedintermediate）假说

Step1

U1snRNP识别并结合在5’剪接位点。

Step2

U2AF（U2辅助因子）结合在3’剪接位点，BBP（分枝位点结合蛋白）结合在分枝位点，形成早期复合物（Earlycomplex）。

Step3

U2snRNP替换BBP的结合，识别分枝位点，使A外露，形成A复合物。

Step4

U2AF离开，U4/U5/U6snRNPs一起结合到U1和U2之间的RNA上，使内含子RNA弯曲，形成B复合物。

Step5

U1snRNP离开，U6结合到之前U1结合的位点（5’剪接位点）。

Step6

U4snRNP离开，使U6和U2结合，形成剪接活性中心。U6snRNP一方面与内含子的5’端结合，一方面与U2结合，拉近分枝位点A与内含子的5’端，帮助分枝点的A进攻5’剪接位点。

Step7

分枝位点的A的2’-OH攻击5’剪接位点，打开磷酸二酯键，A的2’-OH与内含子5’末端的G的磷酸形成磷酸二酯键，并形成套环结构。

Step8

U5snRNP通过分子间相互作用把5’和3’端的两个外显子拉在一起，5’端外显子的3’-OH与3’端外显子的磷酸基形成磷酸二酯键，将两段外显子连接起来。

Step9

U2/U5/U6snRNP和内含子一