细胞分子模型(1).ppt

高新技术为高通量药物筛选提供了有效的手段和方法蛋白质组学为高通量筛选提供了大量的新的药物靶点分子和细胞生物学阐明了药物的作用机制生物芯片技术为高通量筛选提供了更多的信息组合化学合成与组合生物合成技术为高通量药物筛选提供了大量化合物,扩大了药物发现的范围第31页，共43页，星期日，2025年，2月5日关于细胞分子模型(1)第1页，共43页，星期日，2025年，2月5日第1节概述细胞分子模型与动物模型的区别：动物模型优点：传统的筛选方法直接反映治疗效果、不良反应、毒性作用预测临床价值、应用前景不足：筛选效率低，并非均有疾病模型，动物个体差异，成本高第2页，共43页，星期日，2025年，2月5日细胞、分子水平药物筛选模型优点：耗材少药物作用机制明确筛选规模大，高通量筛选已成为药物筛选的主要方法快速、微量、大规模为特征的高通量筛选背景：药物的作用机制要从细胞水平去探索潜在的药物作用靶点数目和有待筛选的化合物数目增多特点：筛选规模和筛选速度更大筛选模型的检测技术能够更快速、全面反映被筛样品的生物活性特征第3页，共43页，星期日，2025年，2月5日分子水平的药物筛选模型：受体、酶、通道、基因、其他标准的体外分子水平筛选优点：快速微量筛选结果准确、稳定，易于评价不足：只能对特定靶点的单指标检测提供化合物对靶点作用的有限信息，无法对化合物的生物活性进行综合评价单纯的分子水平的高通量药物筛选技术已不能满足新药发现的需要第4页，共43页，星期日，2025年，2月5日受体筛选模型受体与放射性配体结合模型：将受体、配体、被测物及必要的辅助因子一起加入到缓冲溶液中温孵达到平衡后过滤,滤纸上残留的即为结合的放射性配体,通过液体闪烁计数来测量灵敏度高、特异性强适合大规模筛选第5页，共43页，星期日，2025年，2月5日酶筛选模型:筛选作用于酶的药物主要观察药物对酶活性的影响酶的反应底物和产物皆可作为检测指标,由此确定反应速度第6页，共43页，星期日，2025年，2月5日第２节细胞水平药物筛选模型细胞水平药物筛选模型：以细胞功能为基础的筛选模型(1)完整细胞，活细胞自然条件下研究药物对生命体功能的影响，接近体内的生化过程，比较准确地了解药物的生物学特性，提供生物相关信息，一次试验可获得多个参数的高内涵信息第7页，共43页，星期日，2025年，2月5日(2)着眼于细胞整体的某些功能和信号转导途径中的其他位点在对每一个分子通路并不完全了解的情况下,细胞水平筛选是唯一可用的方法(3)鉴定分子水平发现的化合物(4)观察被筛选样品对细胞的作用,不反映药物作用的具体途径和靶标,只反映药物对细胞生长过程的综合作用第8页，共43页，星期日，2025年，2月5日(5)细胞模型的材料来源较容易用于药物筛选的细胞：正常细胞、转基因和病理细胞等多数生物性物质均可通过转基因的方法由细胞表达(6)分子生物学和细胞生物学手段特别是基因芯片技术发现疾病有关基因,克隆建立稳定细胞株大规模药物筛选第9页，共43页，星期日，2025年，2月5日目前：(1)微量化，超高通量化1536孔板，荧光方法可达3456－9600孔微量化技术是实行超高通量筛选(uHTS)的基础载体微孔板硬度、自动化加样精度检测系统数据分析系统(2)均质检测：一步加入第10页，共43页，星期日，2025年，2月5日(3)多指标、多靶点、多通道检测是现今细胞水平高通量筛选技术的核心和关键光显微荧光成像技术是进行多指标检测的基础多指标、多靶点检测有助于发现药物作用的新途径，深入认识药物作用的机制为筛选具有互补的多靶点作用机制的单一治疗药物提供了手段和工具(4)实时动态检测和可视化对活细胞进行荧光标记，荧光成像技术，分子水平的实时动态检测和可视化研究自动图像分析和数据量化分析第11页，共43页，星期日，2025年，2月5日第３节常用技术1细胞水平重组技术重组技术是细胞水平高通量常用技术手段经典方法是通过重组基因在宿主细胞基因组的随机整合而产生稳定细胞株不足：重组基因的定位不可预测，表达水平受重组位点的影响，基因拷贝数不确定，阳性克隆的产生率低，筛选时间长等现用游离体载体(episomalvector)：转染效率高，阳性克隆筛选速度快第12页，共43页，星期日，2025年，2月5日2报告基因技术将靶基因连接到细胞上，通过激活或抑制靶基因导致报告基因的表达，通过比色、荧光或发光的方法检测简便，如荧光素酶(luciferase)和β-半乳糖苷酶报