重组DNA常用载体课件.pptx

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小节PART

重组DNA常用载体

理想载体具备的条件

自主复制能力或能整合到宿主染色体上与基因组一同复制的能力

合适的限制性酶切位点供外源DNA片段插入

常用的筛选标记有抗药性、酶基因、营养

分子量不宜过大，以便于容纳较大的外源DNA片段并获得较高的拷贝数

常用的载体

质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等

根据用途不同

克隆载体（cloningvector）

表达载体（expressingvector）

2.1质粒

pBR322质粒载体（最早被广泛应用克隆的载体）

组成

来源于ColE1的派生质粒pMB1的复制起始位点

来源于pSF2124质粒易位子Tn3的Ampr

来源于pSC101质粒的Tetr

特点

带有一个复制起始点（ori）

抗生素抗性基因（Ampr和Tetr）作选择标志

数个单一的限制性酶切位点

较小的分子量：易于自身DNA的纯化，而且能有效地克隆6kb大小的外源DNA片段

较高的拷贝数（每个细胞达1000～3000个拷贝）

pUC质粒载体系列（在pBR322基础上改建而成）

组成

来自pBR322质粒的复制起始点

Ampr基因

大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因（LacZ）启动子及编码α-肽链的DNA序列（LacZ′基因）

多克隆位点（位于LacZ′基因中靠近5′端）

优点

具有更小的分子量和更高的拷贝数

仅保留了pBR322的复制子和Ampr

具有来自大肠杆菌LacZ操纵子的LacZ′基因，适应于组织化学筛选重组体

优越性：pUC是最通用的大肠杆菌克隆载体之一

pUC18/pUC19质粒载体结构

pBR332质粒结构示意图

2.2噬菌体

λ噬菌体载体

粘粒载体称柯斯质粒（cosmid）

单链丝状噬菌体载体

λgt10（插入型）结构

Charon40（替换型）结构

粘粒载体pJB8结构

M13mp18/M13mp19结构