T_ZHCA 029-2024 化妆品舒缓功效测试角质形成细胞白介素-8生成抑制法.docxVIP

ICS71.100.70CCSY42

团体标准

T/ZHCA029—2024

化妆品舒缓功效测试

角质形成细胞白介素-8生成抑制法

Testofsoothingefficacyforcosmetics—

Methodforinhibitinginterleukin-8productionofkeratinocytes

2024-01-15发布2024-04-15实施

浙江省健康产品化妆品行业协会

发布

Ⅰ

T/ZHCA029—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由浙江省食品药品检验研究院提出。

本文件由浙江省健康产品化妆品行业协会(ZHCA)归口。

本文件起草单位:浙江省食品药品检验研究院、广东博溪生物科技有限公司、珀莱雅化妆品股份有限公司、爱茉莉太平洋(上海)研发有限公司、高浪控股股份有限公司。

本文件主要起草人:桑晶、何立成、卢永波、冯潇、田超凡、徐行行。

1

T/ZHCA029—2024

化妆品舒缓功效测试

角质形成细胞白介素-8生成抑制法

1范围

本文件描述了化妆品舒缓功效的一种体外测试方法。

本文件适用于可均匀分散在溶液中的化妆品及原料的舒缓功效的测试。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语及定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

角质形成细胞keratinocyte

构成表皮基底层至角质层的主要细胞。3.2

白介素-8interleukin-8;IL-8

巨噬细胞和上皮细胞等分泌的细胞因子。

注1:白介素是白细胞及其他特殊细胞产生并在这些细胞间发挥调节作用的细胞因子。

注2:白介素-8是白介素的一种亚型。3.3

舒缓soothing

有助于改善皮肤刺激等状态的功效。

4试验原理

角质形成细胞白介素-8生成抑制法(以下简称“本方法”)利用微生物引起角质形成细胞发生刺激反应的原理,即通过脂多糖诱导角质形成细胞表面TLR跨膜受体,激活NF-κB炎症信号传导通路,从而下游释放系列炎症因子,如IL-8等,引发皮肤出现红斑、瘙痒等症状的过程。通过计算受试物抑制IL-8释放的水平来反应受试物的舒缓功效。

5试剂和材料

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。

2

T/ZHCA029—2024

5.1细胞:原代人源角质形成细胞(10代以内)或人永生化表皮角质形成细胞株(如HaCaT)。

5.2与角质形成细胞相适应的培养基及血清。

5.3胰蛋白酶-EDTA溶液。

5.4磷酸盐缓冲液(PBS):pH7.2~7.4。

5.5水,符合GB/T6682规定的三级水。

5.6脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),纯度≥99%,用水配成25mg/mL储备液,使用终浓度为60μg/mL的溶液。

5.7聚肌胞苷酸(Polyriboinosinicpolyribocytidylicacid,PolyI:C),纯度≥90%,用水配成10mg/mL储备液,使用终浓度为100μg/mL的溶液。

5.8噻唑蓝(MTT),纯度≥98%,临用新配成0.5mg/mL的MTT溶液。

5.9二甲基亚砜(DMSO)。

5.10人IL-8ELISA检测试剂盒(采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法)或其他IL-8检测试剂。

5.11阳性对照物:地塞米松,纯度≥98%,用二甲基亚砜配成100mg/mL储备液,使用终浓度为100μg/mL的溶液。

5.12阴性对照组:分别加入聚肌胞苷酸和脂多糖于培养基中,聚肌胞苷酸的终浓度为60μg/mL,脂多糖的终浓度为100μg/mL,作为阴性对