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预防篇一一兽医微生物学综合实验

实验一病原性细菌常规检验技术

病原性细菌常规检验是兽医必须掌握的一项基本功，这直接关系疫病的发现与

制，本实验主要通过增菌培养基、选择培养基或鉴别培养基从病料中分离可疑沙门氏菌,

经镜检，纯培养后，将其纯培养物回归实验动物，结合其生理生化实验指标及血清学反

应特性作出最终判断，鉴定到属。

目的要求

了解采样、分离培养的基本原则。

熟悉沙门氏菌的形态及染色特性。

熟悉培养基的制备原则和方法。

掌握沙门氏菌的常规微生物学诊断方法。

内容与安排

阶段一沙门氏菌的形态、培养特性的观察，实验材料的增菌与分离培养。

阶段二识别菌落、作纯培养及三糖铁琼脂培养。

阶段三进行动物实验与生化实验。

阶段四血清学诊断。

阶段一分离培养

材料与仪器

材料：不同种沙门氏菌致死动物的病料，氯化镁孔雀绿增菌液，四硫磺酸钠煌绿增菌液,

亚硒酸盐胱氨酸增菌液，DHL平板，亚硫酸蚀琼脂平板，常规染色用试剂及备品。

仪器：光学显微镜，温箱，天平，电热炉，高压蒸汽灭菌器，电热干燥箱。

实验方法

准备器材及配制本阶段所需培养基。

用病料中直接抹片，经革兰氏染色镜检观察可疑菌的形态。

取少量病料在无菌环境下,经研磨接种于氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液,

42℃培养18-24h,或接种亚硒酸盐胱氨酸增菌液于37℃培养18-24h,同时将病料接种于

亚硫酸锌琼脂平板和DHL平板，37℃培养18-24h。

将增菌培养物接种于亚硫酸钮琼脂平板和DHL平板，37℃培养18-24h。如（病料直接分

离培养成功，4可省略。）

观察菌落形态及染色特性。

结果要求

观察沙门氏菌的形态、大小与排列方式，掌握其染色特性。

掌握沙门氏菌在鉴别培养基中培养特性及菌落特征，注意与其它细菌的区别。

注意事项

所用用具和操作均需无菌。

染色涂片不宜太厚。

划线分离细菌不宜将琼脂划破。

思考题

不同种属沙门氏菌致病性有何区别？

为何在分离培养前进行增菌？

用病料涂片、染色与培养物涂片、染色的区别，及注意事项？

阶段二纯培养

材料与仪器

材料：获得沙门氏菌单个菌落的平板培养物，普通琼脂斜面培养基、三糖铁培养基。

仪器：同阶段一

实验方法

将获得沙门氏菌单个菌落接种于普通琼脂斜面培养基，37C培养24h»

经革兰氏染色镜检培养物纯度。

将获得纯培养物接种于三糖铁培养基，37C培养24h。

结果要求

镜检培养物纯度，观察多个视野，确认无其他杂菌后进行后续实验。

接种三糖铁培养基时，先斜面化线，后高层穿刺，意观察培养后培养基的变化。

意事项

所用用具和操作均需无菌。

染色涂片不宜太厚。

意三糖铁培养基的制备、接种及观察。

思考题

纯培养的目的及意义？

何谓三糖铁培养基，用其如何区分肠杆菌科的不同成员？

阶段三动物实验及生化实验

材料与仪器

材料：沙门氏菌的纯培养物、灭菌生理盐水、小白鼠、鸡等无沙门氏菌实验动物、鉴别

沙门氏菌所用生化培养基、各种常用生化试剂（醋酸铅试纸条、MR试剂、VP试剂、写|

躲试剂等）。

仪器：温箱、射器等

实验方法

将确定为无杂菌的沙门氏菌纯培养物，用生理盐水经适当稀释后，分别采用腹腔射和

肌肉射小白鼠和鸡，与健康动物隔离饲养，随时观察变化。

同时将沙门氏菌纯培养物接种普通肉汤培养基H（2s生成实验）、葡萄糖蛋白月东水2支

V（P、MR实验）、蛋白陈水。引味实验）五种糖发酵管（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘

露醇、蔗糖）、柠檬酸盐琼脂（硝酸盐利用实验），37℃培养2-3天。

滴加相应的生化试剂，观察生化实验结果。

结果要求

随时观察接种实验动物的变化，观察出现的临床症状，剖检后观察病变部位，判断是否

符合沙门氏菌的致病特征，取样染色镜检。

观察生化培养基的变化，记录结果，判断是否符合沙门氏菌的生化特性。

意事项

意实验动物的保定与隔离饲养。

生化实验中糖发酵管均为穿刺接种。

思考题

常用实验动物有哪些，分别如何保定、接种？

区别大肠杆菌和沙门氏菌常做的生化实验包括哪儿种？

阶段四血清学实验

材料与仪器

材料：沙门氏菌的纯培养物，玻片，沙门氏菌的多价0