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消毒剂及其使用效果的测定

1.消毒剂杀菌效果测定（质检）

1.1试验材料:

1.1.1.消毒剂:由厂家提供或从市场购入。

1.1.2.试验菌:选用目前对鸡群危害最大的大肠杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌、绿脓杆菌等四种常见的致病菌作为试验菌,菌种最好来自现场。

1.1.3.培养基:麦康凯琼脂(Mac)、高盐甘露醇琼脂(MSA)、沙门氏志贺氏琼脂(S.S)、营养琼脂(NA)、营养肉汤(NB)。

1.1.4.鸡粪:取自现场。

1.1.5.器械:15mm×180mm灭菌试管；2ml、5ml、10ml灭菌吸管；移液泵；天平；酒精灯等。

1.2.测定方法:

1.2.1.试验菌液的制备:将上述四种试验菌种转接于普通肉汤培养基中,于37℃温箱培养24小时,分别计数菌落数,最后将菌液稀释至106-8个/毫升。

1.2.2.培养基的准备:将麦康凯琼脂(Mac)、高盐甘露醇琼脂(MSA)、沙门氏志贺氏琼脂(S.S)、营养琼脂(NA)各取一块为一组，每组为一个时间段，根据消毒剂稀释度的数量配成七组，将每块板底面用记号笔分成6等分，分别在每个等分区内写明消毒剂各稀释度及细菌对照的代号。

1.2.3.测定操作:

1.2.3.1.加鸡粪组：

a.用灭菌蒸馏水将消毒剂按使用说明配成5个测试浓度,将各浓度的消毒剂分装于四个灭菌试管中,每管5毫升。

b.向盛有各浓度消毒剂的每四个试管中分别加入大肠杆菌、匍萄球菌、沙门氏菌及绿脓杆菌的悬液5ml,同时向各管中加入10%鸡粪1毫升,以消除实验误差,因生产实践中有机物对消毒效果有影响。

c.分别于加样后5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、1小时、2小时、24小时等不同时间取适量消毒液混合物加入上述准备好的各种培养基的相应位置上。

d.细菌对照:对每个时间段的四种致病菌以蒸馏水代替消毒液重复上述试验即为各种菌对照。

e.将加好消毒剂的各组培养基置于37℃恒温培养箱中。培养24小时后记录大肠杆菌的生长情况，48小时后记录匍萄球菌、沙门氏菌及绿脓杆菌的生长情况。

1.2.3.2.不加鸡粪组：

除不向各试管中加入鸡粪外，其余各项设置同加鸡粪组。

1.3.结果与结论:

在正常使用浓度下，作用5分钟，对大肠杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌及绿脓杆菌的杀灭率应达百分之百。

2.使用中的消毒剂的效力测定

为了验证消毒剂在实际应用中的效力,以确保消毒剂在现场真正起到杀菌消毒作用,应随时采集使用中的按要求配制的消毒液,测定其是否仍有消毒作用。

2.1.试验材料:

2.1.1.器械:250ml灭菌采水瓶;直径90mm灭菌平皿;2ml灭菌吸管;移液泵等。

2.1.2.培养基:营养琼脂、麦康凯琼脂、高盐甘露醇琼脂、霉菌培养基。

2.2.测定方法:

2.2.1.见样品采集方法中消毒液采集一项。

2.2.2.将采水瓶登记编号,然后移入无菌室。

2.2.3.取一组灭菌平皿(4块),用记号笔标明与取水瓶编号相同的号码。

2.2.4.用灭菌吸管分别取1ml消毒液加入上述4块平皿内。

2.2.5.依此法加完所有样品。

2.2.6.用倾注法将已准备好的四种培养基分别浇于上述4块平皿内,轻摇使其混匀。

2.2.7.待凝固后放37℃温箱培养24-48小时后,分别在营养琼脂、麦康凯琼脂、高盐甘露醇琼脂、霉菌培养基上计数总菌、大肠杆菌、葡萄球菌、霉菌数。

2.3.结果判定:如总菌数超过10个,或有致病菌的存在,则认为其已无消毒作用，应换以新配制的消毒液。