《光果甘草根提取物中主要有效成分含量的测定 高效液相色谱法》（征求意见稿）.docx

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T/GDFCA104—2025

光果甘草根提取物中主要有效成分含量的测定高效液相色谱法

警示——使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本文件描述了高效液相色谱法测定光果甘草根提取物中主要有效成分含量的方法，包括方法的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样的制备、分析步骤、结果计算、精密度等要求。

本文件适用于光果甘草根提取物中黄酮类标志物（光甘草定和芒柄花黄素）和三萜类标志物（光甘草醇和甘草内酯）含量的测定，其他固体、半固体植物提取物可参照执行。

本文件不适用于光甘草定≥50%的光果甘草根提取物。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经甲醇超声提取，过滤，续滤液中各物质经液相色谱柱分离后，用紫外检测器进行检测，用保留时间进行定性，外标法定量。

5试剂和材料

5.1甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。

5.2乙腈（C2H3N，CAS号：75-05-8）：色谱纯。

5.3磷酸（H3PO4，CAS号：7664-38-2）：分析纯。

5.40.05%磷酸水溶液：取500μL磷酸（见5.3），加一级水定容至1L。

5.5标准物质具体包括：

——光甘草定标准物质（Glabridin，C20H20O4，CAS号：59870-68-7），纯度≥98%；

——芒柄花黄素标准物质（Formononetin，C16H12O4，CAS号：485-72-3），纯度≥98%；

——光甘草醇标准物质（Glabrol，C25H28O4，CAS号：59870-65-4），纯度≥98%；

——甘草内酯标准物质（Glabrolide，C30H44O4，CAS号：10401-33-9），纯度≥98%。

5.6标准储备液的类别及制备步骤具体包括：

——甘草内酯标准储备液（2000mg/L）：准确称取20mg（精确至0.1mg）甘草内酯标准物质（见5.5），用甲醇（见5.1）溶解并定容到10mL，混合均匀。标准储备液避光于0℃~4℃下储存，有效期2个月；

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——芒柄花黄素标准储备液（1000mg/L）：准确称取10mg（精确至0.1mg）芒柄花黄素标准物质（5.5），用甲醇（见5.1）溶解并定容到10mL，混合均匀。标准储备液避光于0℃~4℃下储存，有效期2个月；

——光甘草定标准储备液（1000mg/L）：准确称取10mg（精确至0.1mg）光甘草定标准物质（见5.5），用甲醇（见5.1）溶解并定容到10mL，混合均匀。标准储备液避光于0℃~4℃下储存，有效期2个月；

——光甘草醇标准储备液（1000mg/L）：准确称取10mg（精确至0.1mg）光甘草醇标准物质（见5.5），用甲醇（见5.1）溶解并定容到10mL，混合均匀。标准储备液避光于0℃-4℃下储存，有效期2个月。

5.7标准工作溶液的类别及制备步骤包括：

——芒柄花黄素标准工作溶液：分别吸取适量的芒柄花黄素标准储备液（见5.6）至5mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L的标准工作溶液（可根据样品含量适当调节溶液的浓度），临用现配。

——光甘草定标准工作液：分别吸取适量的光甘草定标准储备液（见5.6）至5mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L、1000mg/L的标准工作溶液（可根据样品含量适当调节溶液的浓度），临用现配；

——光甘草醇标准工作液：分别吸取适量的光甘草醇标准储备液（见5.6）至5mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L、1000mg/L的标准工作溶液（可根据样品含量适当调节溶液的浓度），临用现配；

——甘草内酯标准工作溶液：分别吸取适量的甘草内酯标准储备液（