《黄精及其提取物中薯蓣皂苷含量的测定 高效液相色谱法》（征求意见稿）.docx

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T/GDFCA081—2025

黄精及其提取物中薯蓣皂苷含量的测定高效液相色谱法

1范围

本文件描述了用高效液相色谱测定黄精和黄精提取物中薯蓣皂苷含量的方法，包括方法的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样的制备、分析步骤、结果计算、精密度等要求。

本文件适用于黄精及其提取物中薯蓣皂苷含量的测定，其他植物性食品及中药材可参照执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经表面活性剂浸泡一定时间后超声辅助提取，再经正丁醇液-液萃取，浓缩、复溶，经微孔滤膜过滤，采用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。

5试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1十二烷基硫酸钠（C12H25SO4Na，CAS号：151-21-3）。

5.2正丁醇（CH3(CH2)3OH，CAS号：71-36-3)：色谱纯。

5.3乙腈（C2H3N，CAS号：75-05-8）：色谱纯。

5.4甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。

5.5氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。

5.6高氯酸（HClO4OH，CAS号：7601-90-3）。

5.7十二烷基硫酸钠溶液（0.024mol/L）：称取6.9g十二烷基硫酸钠（5.1）及5.85g氯化钠（5.5），用水溶解并定容至1000mL。

5.8薯蓣皂苷对照品（C45H72O16，CAS号：19057-60-4），纯度≥98%。

5.9对照品溶液（500mg/L）：准确称取5.0mg（精确至0.1mg）薯蓣皂苷标准品（5.8），用甲醇（5.4）溶解，定容至10mL，混匀，4℃冰箱可保存5天。

6仪器和设备

6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器（或二极管阵列检测器）。

6.2分析天平：感量0.01mg和0.001g。

6.3水浴锅。

6.4高速粉碎机。

6.5超声波清洗器。

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6.6离心机：转速不低于5000r/min。

6.7旋转蒸发仪。

6.8微孔滤膜：0.22μm，有机相型。

6.9其它实验室常用器皿：如离心管、鸡心瓶等。

7测定步骤

7.1试样制备

取固体样品50g，粉碎后使其全部可通过80目标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中，密封，并标明标记，于常温下保存。

7.2前处理

7.2.1准确称取试样1g（精确至0.001g）于50mL离心管中，加入25mL十二烷基硫酸钠溶液（5.7）浸泡8h后，在30℃条件下超声辅助提取40min。

7.2.2超声提取完成的黄精粉末试样溶液若不足25mL，则加入十二烷基硫酸钠溶液（5.7）补足至25mL，经5000r/min离心3min，转移上清液至另一50mL离心管中，分别加入20mL正丁醇萃取两

次，合并两次上层萃取液至100mL平底烧瓶中。

7.2.3将萃取液于40℃水浴旋转蒸发至近干，加入20mL甲醇（5.4）溶解残渣，溶液过0.22μm有机相滤膜，用于测定。

7.3液相色谱参考条件

7.3.1色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），或性能相当者。

7.3.2柱温：30℃。

7.3.3检测波长：203nm。

7.3.4进样量：10μL。

7.3.5流动相及梯度洗脱条件见表1。

表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min

流速（mL/min）

流动相A（乙腈）/%

流动相B（水）/%

0.00

1.0

40

60

5.00

1.0

40

60

15.00

1.0

70

30

18.00

1.0

100

0

20.00

1.0

40

60

7.4标准曲线的制作

分别准确移取经超声、涡旋溶解的薯蓣皂苷对照品溶液40μL、100μL、200μL、400μL、1000μL、2000μL至10mL容量瓶中，用初始流动相定容至刻度，薯蓣皂苷的浓度为2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。依次由低到高浓度进样检测。以待测物标准