DB22T 2391-2015 “三系”杂交大豆种子纯度鉴定DNA分析方法(SSR).docxVIP

ICS65.020.01B21

备案号：48406-2016DB22吉林省地方标准

DB22/T2391—2015

“三系”杂交大豆种子纯度鉴定DNA分析

方法(SSR)

Assessmentofthepurityofthree-linehybridsoybean-DNAanalysismethod

(SSR)

2015-12-15发布2016-01-25实施

吉林省质量技术监督局发布

I

DB22/T2391—2015

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。

本标准主要起草人：张春宝、彭宝、赵丽梅、张伟龙、张伟、张井勇、闫昊、赵鑫。

1

DB22/T2391—2015

三系杂交大豆种子纯度鉴定DNA标记分析方法（SSR）

1范围

本标准规定了“三系”杂交大豆种子纯度鉴定SSR标记分析方法的原理、纯度检测程序、结果计算及结果报告。

本标准适用于“三系”杂交大豆品种的纯度鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.1农作物种子检验规程总则

GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样

GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验

NY/T1788大豆品种纯度鉴定技术规程SSR分子标记法DB22/2209杂交大豆种子

3术语与定义

DB22/2209界定的以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了DB22/2209中的一些术语和定义。

3.1

雄性不育系cytoplasmmalesterilityline

雄蕊发育退化或败育，不能产生有功能的花粉，但它的雌蕊发育正常，能接受正常花粉而受精结实，并能将雄性不育性遗传给后代的品系。

3.2

保持系maintainerline

保持系可以保持不育系的不育特性，保持系和不育系杂交，当代可以结实，但是子代仍然是不育系，可以让不育系得到繁殖，保有不育系材料。

3.3

恢复系restorerline

常规大豆品种，它的特殊功能是用它的花粉授给不育系，所产生的杂交种育性恢复正常，能自交结实，如果该杂交种有优势，可用于生产。

3.4

三系threeline

雄性不育系、保持系和恢复系三系配套育种，不育系为生产大量杂交种子提供了可能性，借助保持系来繁殖不育系，用恢复系给不育系授粉来生产育性恢复且有优势的杂交种。

3.5

2

DB22/T2391—2015

杂交大豆hybridsoybean

用不育系作母本与恢复系杂交，得到的F1种子。

4原理

简单序列重复（simplesequencerepeats，SSR）是由几个核苷酸为重复单元的长达几十至几百个核苷酸的串联重复序列；由于基本单元重复次数的不同，而形成SSR座位的多态性；根据SSR座位两侧保守的单拷贝序列设计一对特异引物来扩增SSR序列，即可揭示其多态性。SSR标记具有共显性的特点，鉴于母本不育系和父本恢复系在恢复基因的特征连锁区域存在差异，而F1杂交种子具有双亲等位基因的互补带型，据此特征选择恢复基因连锁SSR标记进行分析，可用于区分杂交种和伪杂种。

5纯度检测程序

5.1取样

5.1.1应按GB/T3543.2的规定扦样，从供试样品中随机选取100粒种子。

5.1.2应按GB/T3543.4规定的方法进行发芽，随机选取其中不少于50株幼苗；也可从5.1.1中直接选取不少于50粒干种子。

5.2引物确定

根据不同杂交种品种特异性从14对SSR引物（见附录A）中选取3对作为测试引物。

5.3试验方法5.3.1DNA提取

以幼苗为供检测样品，需称取50mg叶片放入2ml离心管中，加液氮用玻璃棒研磨至粉末状；以干种子为供检测样品，需单粒研磨成粉，称取50mg豆粉放入2ml离心管中。以上样品DNA提取，应按NY/T1788执行。

5.3.2PCR扩增

5.3.2.1PCR反应体系

反应体系包括1×PCR缓冲液；4种dNTPs混合物0.2