流式细胞术实验技巧及数据分析.ppt

第31页，共52页，星期日，2025年，2月5日BrdUrd与PI检测第32页，共52页，星期日，2025年，2月5日BrdUrd与PI检测第33页，共52页，星期日，2025年，2月5日BrdUrd与PI检测第34页，共52页，星期日，2025年，2月5日细胞三色荧光检测第35页，共52页，星期日，2025年，2月5日细胞因子测定*检测T细胞(CD69)活化第36页，共52页，星期日，2025年，2月5日G6=R1*R5第37页，共52页，星期日，2025年，2月5日关于流式细胞术实验技巧及数据分析第1页，共52页，星期日，2025年，2月5日BD公司不同型号流式细胞仪FACSCaliburLSRIIFACSAriaFACSCountFACSVantageDiVaFACSCanto第2页，共52页，星期日，2025年，2月5日一流式细胞仪的基本原理*稳定流动*激发光斑*荧光补偿*荧光素选择二数据分析及开窗第3页，共52页，星期日，2025年，2月5日FCM原理示意图第4页，共52页，星期日，2025年，2月5日层流是液体稳定流动的必要条件,管道中层流的形成要满足雷诺数dρVRe=2300，η式中ρ、η分别为液体的密度和粘滞系数，d和V分别为管道的直径和液体的平均流速。FCM利用层流技术,使细胞流动稳定,并具有自聚焦作用,为细胞分析分选提供技术保证.层流技术第5页，共52页，星期日，2025年，2月5日液流驱动系统（示意图）流速与压力的关系服从Bernoulli方程，即P=(1/2)?V2(忽略高度的变化)。改变气压,就可获得不同的流速。第6页，共52页，星期日，2025年，2月5日第7页，共52页，星期日，2025年，2月5日低速高速

不同样本速率形成的样本流

第8页，共52页，星期日，2025年，2月5日激发光源与光束成形系统第9页，共52页，星期日，2025年，2月5日.20um64um32um032um聚焦距离激光束聚焦透镜强度光束成形与细胞受照方式这种椭圆形光斑的检测区保证每个细胞分别受到光照且受检时受到一致的光照FCM的单细胞照明技术第10页，共52页，星期日，2025年，2月5日第11页，共52页，星期日，2025年，2月5日荧光光谱重叠

FITC和PE荧光光谱重叠

第12页，共52页，星期日，2025年，2月5日UncompensatedvsCompensatedFL1FL2利用电子技术或计算机软件等方法将串入相邻荧光通道的信号加以扣除的方法称“荧光补偿”荧光补偿第13页，共52页，星期日，2025年，2月5日荧光补偿第14页，共52页，星期日，2025年，2月5日Mean值判断补偿第15页，共52页，星期日，2025年，2月5日双或多参数荧光抗体的组合标记FITC+PE488525、575绿色、橙色FITC+Tred488525绿色568615红色FITC+PeCy5488525、675绿色、红色FITC+ECD488525、625绿色、橙红色F+P+PeCy5488525、575、675绿、橙、红色F+ECD+PeCy5488525、575、675绿、橙红色、红色F+P+PeCy5+APC488525、575绿色、橙色633