志贺氏菌检测流程.doc

志贺氏菌属检验的标准操作程序

?

【目的】

???指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。

【该SOP变动程序】

???本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【标本的采集】

???由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内，轻轻转动，然后取出，插入带有编号的塑料试管中，交给检验科人员。

【检验程序】

???采便→立即划线接种SS平板→培养后挑取可疑菌落接种三糖铁斜面及半固体培养基→生化学试验→血清学试验→报告检验结果。

【操作步骤】

???1.?????分离培养

采便后立即用采便棒划线接种SS琼脂平板。36±1℃培养18-24小时，挑取无色半透明的光滑菌落分解乳糖或迟缓分解乳糖的光滑菌落，接种三糖铁斜面及半固体，36±1

????2.?????生化学试验

凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者（斜面产碱或不变色，底层产酸，H2S（—），产气（—），但福氏6型产生少量气体）、无动力、革兰氏阴性杆菌、作V-P试验，苯丙氨酸，赖氨酸，柠檬酸盐，葡萄糖铵试验。其结果全部阴性者，作血清学试验。

???3.?????血清学试验

挑取三糖铁斜面上的培养物，按下列顺序作玻片凝集试验：

?

四种志贺氏——→福氏————→宋内氏————→志贺氏————→志贺氏

多价血清??????多价血清???血清?????2型血清????1型血清

??∣??????+∣???????+∣???????+∣?????????+∣

—∣????????↓????????↓????????↓??????↓

??∣??????福氏菌???????宋内氏菌???志贺氏2型???志贺氏1型

??↓???1-6型???????????????某型+

鲍氏???7-11型??????某组+：组内分型血清———→鲍氏某型

血清：12-15型?????全部—：加热破坏K抗原，重做凝集试验

???16-18型

???福氏菌的鉴定：凡是与福氏多价血清凝集的菌株，可先用3、4，群6，群7，三种因子血清检查，根据群因子血清反应结果，再用型因子血清检查。福氏菌抗原成分如下

?

???

福氏志贺氏各菌型与五型抗原成份

型

型抗原

群抗原

在群因子血清中的凝集反应

3、4

6

7、8

a

I

1，2，4，5，9………

+

-

-

b

I

1，2，4，5，6，9……

+

+

-

2a

Ⅱ

1，3，4………

+

-

-

2b

Ⅱ

1，7，8，9……

-

-

+

3a

Ⅲ

1（3，4），6，7，8，9…

（+）

+

+

3b

Ⅲ

1，（3，4），6……

（+）

+

-

4a

Ⅳ

1，3，4………

+

-

-

4b

Ⅳ

1，3，4，6………

+

+

-

5a

Ⅴ

1，3，4………

+

-

-

5b

Ⅴ

1，5，7，9………

-

-

+

6

Ⅵ

1，2，（4）………

（+）

-

-

变种

—

1，7，8，9………

-

-

+

变种

—

1，3，4………

+

-

-

（）内的抗原可能不存在。

????4.?????菌型的判定和结果的报告?

???根据生化学试验和血清学分型试验结果，判定菌型，报告结果。

【质量控制要求】

???4.?????本程序所用的培养基及试剂依据中华人民共和国国家标准《食品卫生检验方法》微生物部分（GB4789-84）规定的方法配制的，或由省食品卫生监督检验所，省卫生防疫站推荐的合成培养基。

???5.?????增菌及分离必须保证一个一支增菌管，一块平板，禁止多人一管，多人一块平板。

???6.?????分离平板时平板一半以上应有孤立菌落，以供挑选。