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生物选修一-5-1-DNA的粗提取与鉴定.pptVIP

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;讨论:

1.构成生物体的遗传物质是什么?

2.细胞滤液中又哪些成分?

3.怎样才能将细胞内的这些物质别离出来?;1.DNA在NaCl溶液中的溶解性

DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反;2.DNA在酒精溶液中的溶解性

DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质那么可以溶于酒精。利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步别离。

3.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性

①蛋白酶能水解蛋白质,但对DNA没有影响;

②大多数蛋白质不能忍受60-80°C的高温,而DNA在80℃以上才会变性;

③洗涤剂可以溶解细胞膜,去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响。;

4.DNA的鉴定

DNA与二苯胺〔沸水浴〕会染成蓝色,因此,二苯胺可作为鉴定DNA的试剂

;〔一〕实验材料的选取;思考与讨论:

1.可否选用哺乳动物的红细胞作为实验材料?

;1.提取植物细胞DNA时,参加洗涤剂和食盐的作用分别是什么?;〔三〕去除滤液中的杂质;方案二、方案三:;〔四〕DNA的析出与鉴定;1.在DNA的粗提取实验过程中,两次向烧杯中参加蒸馏水的作用是()。

A.稀释血液、冲洗样品

B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出

C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量

D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA;制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠,静置或离心

破碎细胞,释放DNA…加蒸馏水,同一方向快速通方向搅拌

↓→过滤,除去细胞壁、细胞膜等。

溶解核内DNA…………参加NaCl至2mol/L,同一方向缓慢搅拌

↓→过滤,除去不溶杂质

DNA析出……向上述滤液缓缓参加蒸馏水,并轻轻地沿一个方向搅拌,出现丝状物,当丝状物不再增加时,停止加水〔此时NaCl浓度为0.14mol/L〕

↓→除去细胞质中的大局部物质

过滤出含DNA的丝状物

DNA丝状物再溶解:再次用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA

DNA初步纯化??…与等体积95%冷却酒精混合,析出白色丝状物

↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。

DNA鉴定………………二苯胺,沸水浴,呈现蓝色

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