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His标签蛋白纯化面面观——His标签蛋白纯化流程

提到His标签，大家一定都不陌生。His标签是一个只有6个组氨酸的小标签，但神通广大。首先，His标签比较

小，对蛋白结构和功能影响较小，一般纯化后也可以无需切除；其次，His标签可以和其他标签一起使用，增加纯化的

纯度；此外，His标签也可以在变性条件下进行蛋白纯化，适用于特殊的操作或者包涵体纯化；最后，His标签蛋白的

纯化方式多样，纯化工艺也非常成熟，可以选择重力操作和离心操作，也可以选择AKTA纯化系统。

His标签如此好用，各位是不是也跃跃欲试了呢？今天小优给大家整理了我们使用频率很高的重力纯化以及仪器纯

化的操作流程，一起来看看吧！

重力纯化

以cytiva品牌NiSepharose6FF填料为例

1缓冲液配制

按照以下配方进行缓冲液配置：

结合缓冲液：20mM磷酸钠缓冲液，0.5M氯化钠，20-40mM咪唑，PH7.4

洗脱缓冲液：20mM磷酸钠缓冲液，0.5M氯化钠，500mM咪唑，PH7.4

缓冲液配置完成后需要预先过滤和超声去除气泡。

2样品准备

样品应完全溶解。为了避免色谱柱堵塞，建议离心并通过0.45μm过滤器过滤，以去除细胞碎片或其他颗粒物质。

如果样品溶解在20mM磷酸盐缓冲液(0.5MNaCl，pH7.4)以外的缓冲液中，将其NaCl浓度调整为0.5M,pH为7-8

3纯化前准备

PD-10重力空柱准备。用20%的乙醇洗涤滤膜，用蒸馏水润洗滤膜，然后将滤膜放入PD-10空柱；

填料准备。将需要量的填料悬浊液从瓶中转移到离心管中，用500xg离心5min以沉淀填料。除去上清，加入适量

蒸馏水，轻柔的振荡填料悬浊液3min，用500xg离心5min。除去上清，加入适量结合缓冲液进行平衡，轻柔的振荡

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填料悬浊液3min，用500xg离心5min。然后把填料悬浊液转移到量筒中，再加入适量体积的结合缓冲液，使悬浊液

中的填料浓度达到50%。

4重力柱纯化

将样品加入含有50%填料的悬浊液中（样品在上柱前要进行离心和过滤）。NiSepharose6FF的平均载量是

40mg/ml。则1ml的50%悬浊液的载量为大约20mg蛋白。

将样品和填料混合物在摇床上低速混合1h。

将样品和填料混合物加入到PD-10的空柱中，收集流出物。

用结合缓冲液洗涤2-5个柱体积，收集流出物。

用4个柱体积的洗脱缓冲液洗脱，收集流出物。

5检测

对流出物进行检测分析，跑胶鉴定

仪器纯化

以cytiva品牌HisTrapFF预装柱为例

1缓冲液配制

按照以下配方进行缓冲液配置，

结合缓冲液：20mM磷酸钠缓冲液，0.5M氯化钠，20-40mM咪唑，PH7.4

洗脱缓冲液：20mM磷酸钠缓冲液，0.5M氯化钠，500mM咪唑，PH7.4

缓冲液配置完成后需要预先过滤和超声去除气泡。

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2样品准备

样品应完全溶解。为了避免色谱柱堵塞，建议离心并通过0.45μm过滤器过滤，以去除细胞碎片或其他颗粒物质。

如果样品溶解在20mM磷酸盐缓冲液(0.5MNaCl，pH7.4)以外的缓冲液中，将其NaCl浓度调整为0.5M,pH为7-8

3系统准备与装柱

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系统设置一个低流速，移除预装柱顶部的堵头，把柱子连接到KTA纯化仪的接头上，注