通过细胞核移植克隆动物课件-高二下学期生物浙科版选择性必修3.pptx

第二节通过细胞核移植克隆动物;思考1：植物细胞具有全能性，动物细胞具有全能性吗？;全能细胞：可发育成完整个体，例如：受精卵及其第一次卵裂所得的2个分裂球都可发育成完整个体，形成同卵孪生个体。;高度分化的动物细胞不表现全能性，受到细胞质内物质的限制。;资料1：1938年，斯佩曼提出将胚胎细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中构建新胚胎的设想。

资料2：1952年，布里格斯和金将豹蛙囊胚细胞的核移植到去核的卵中，形成重组细胞，重组细胞发育成蝌蚪。

资料3：1962年，我国的童第周首次将核移植的技术应用于鱼类。;是指将体细胞核移入一个去核的卵母细胞中，并使其发育成动物个体的过程。利用该技术培育出的动物称为克隆动物。;动物成熟体细胞的细胞核仍然具有脱分化和使其后代细胞再分化实现全能性的能力。;去核常用方法：

1.低等两栖动物：紫外线破坏处理

2.高等哺乳动物：显微去核针吸出（显微操作法）;①卵细胞体积小

②要借助精密的显微操作仪和高效率的细胞融合法

③胚胎需要在体内发育（胚胎移植）;哺乳动物细胞核移植实验：;;a.营养限制性培养:

将这些乳腺细胞先保持在含有10%牛血清的培养基中，在与卵细胞融合前，将牛血清的浓度降到0.5%，这种牛血清饥饿处理使乳腺细胞处于细胞周期的G0阶段。由于培养过程中通过降低血清浓度限制了细胞增殖所必需的某些营养，称为营养限制性培养。

营养限制性培养的目的是通过减少细胞中基因的表达利于供体细胞核的一系列变化和细胞融合后基因表达的分子开关的启动，提高克隆的成功率。

G0阶段是细胞停止分裂但仍保持代谢活性的休眠阶段，此时，细胞核内会发生一系列化学变化，导致其中基因启动程序重新编排，有利于细胞融合后卵细胞质中的蛋白因子能够再次启动乳腺细胞核的分子开关，进而对胚的发育进行调控。;克隆动物的母本有三个，即体细胞核供体、卵细胞细胞质供体和代孕母体。

;1、高度分化的动物细胞，其细胞核具有全能性。（证明了高度分化的细胞经过一定技术处理，也可以恢复到类似受精卵时期的功能，表现出全能性）

2、证明了在胚胎和个体发育中，细胞质具有调控细胞核发育的作用。;1、重组卵细胞最初分裂时，虽然复制了DNA，但基因的转录并未开始。

2、供体核DNA（乳腺细胞的核DNA）开始丢失了源于乳腺细胞的调节蛋白，正是这些调节蛋白最初阻止了核基因的表达。

3、经过三次分裂后，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞的细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，胚细胞开始表达自己的基因，进而调控胚在代孕母亲子宫中的进一步发育。;（1）具有包含物种完整基因组的细胞核的活细胞。(如乳腺上皮细胞)

（2）能有效调控细胞核发育的细胞质物质。

（如去核的卵的细胞质）

（3）完成胚胎发育的必要的环境条件。

（如诱导核-质重组细胞生长、分化的实验条件和怀胎母体的子宫环境）;1.细胞核移植的原理

2.供体和受体的选择;(1)原理：动物细胞核的全能性。

(2)供体：有重要利用价值的动物的体细胞。

(3)受体：MⅡ期卵母细胞

①选择原因：a.体积大，易操作；b.MⅡ期卵母细胞的细胞质中含有激发细胞核全能性表达的物质和营养条件。

②去核原因：保证克隆动物的核基因全部来自供体细胞。

③去核方法：常用显微操作去核；也可采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法去核或使其中的DNA变性。

(4)克隆动物遗传物质来源

①核内遗传物质：全部来自供体细胞。

②细胞质中的遗传物质：一部分来自核供体细胞，另一部分来自受体卵母细胞。;（1）治疗性克隆;克隆动物作为生物反应器，生产大量医用蛋白;2.存在问题;动物细胞培养（细胞群）