红细胞检验的基本方法.pptVIP

一、红细胞渗透脆性试验1.原理渗透脆性试验（osmoticfragilitytest）检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力。红细胞在低渗盐溶液中，当水渗透其内部达一定程度时，红细胞发生膨胀破裂。2、参考值：简易半定量法开始溶血：75.2～82.1mmol／L（4.4～4.8g／L）NaCl完全溶血：47.9～54.7mmol／L（2.8～3.2g／L）NaCl3、临床评价：①脆性增加：遗传性球形红细胞增多症、椭圆形红细胞增多症和部分自身免疫性溶血性贫血。②脆性降低：珠蛋白生成障碍性贫血、血红蛋白C、D、E病，低色素性贫血、肝疾病等。二、自身溶血试验及其纠正试验临床评价：正常人红细胞孵育48小时,不加纠正物的溶血率＜3.5％，加葡萄糖的溶血率＜1.0％，加ATP纠正物的溶血率＜0.8％。2、参考值：原理：红细胞在37℃孵育48小时，其间由于膜异常引起钠内流倾向明显增加，ATP消耗过多；或糖酵解途径酶缺乏所引起ATP生成不足等原因可导致溶血，称为自身溶血试验。在孵育时，加入葡萄糖或ATP作为纠正物，观察溶血可否有一定的纠正，称为纠正试验。本试验不够敏感和特异，仅对遗传性球形红细胞增多症有较大诊断价值.丙酮酸激酶缺乏症时不能利用葡萄糖产生ATP,其自身溶血率明显增加，加葡萄糖不能纠正，加ATP可纠正。遗传性球形红细胞增多症自身溶血率增加，加入葡萄糖或ATP后明显纠正。G－6－PD缺乏症等戊糖旁路代谢缺陷的病人自身溶血率增加，能被葡萄糖纠正。获得性溶血性贫血或自身免疫性溶血时试验结果常各有不同，对诊断意义不大。二、自身溶血试验及其纠正试验三、红细胞膜三磷酸腺苷活性测定原理：Na＋－K＋－ATP酶、Ca2＋－Mg2＋－ATP酶和Mg2＋－ATP酶都是红细胞膜上的ATP酶。为测定酶的活性可分别测定酶作用于ATP的水解产物无机磷含量，若在基质中只加入Ca2＋－Mg2＋－ATP酶可测定Ca2＋－Mg2＋－ATP酶的活性，若在基质中加入Na＋、K＋、Mg2＋和ATP，测定的为Na＋－K＋－ATP酶和Mg2＋－ATP酶的共同含量，再在基质中加入Na＋－K＋－ATP酶的抑制剂，测定结果仅为Mg2＋－ATP酶活性，两者的差为Na＋－K＋－ATP酶活性。红细胞膜Na＋－K＋－ATP酶：（2.93±0.67）mU／109红细胞Ca2＋－Mg2＋－ATP酶：0.4～2.5μmol／L－1·mg膜蛋白·h－1遗传性球形红细胞增多症：Na＋－K＋－ATP酶活性增加，Ca2＋－Mg2＋－ATP酶活性减低。蚕豆病：Ca2＋－Mg2＋－ATP酶活性降低。许多药物作用于红细胞时，Na＋－K＋－ATP酶和Ca2＋－Mg2＋－ATP酶活性改变。2、参考值:3、临床评价：四、酸化甘油溶血试验原理遗传性球形红细胞增多症AGLT50明显缩短（25～150s）。自身免疫性溶血性贫血、肾功能衰竭、妊娠等AGLT50也可缩短。3、临床评价：2、参考值：当甘油存在于低渗溶液氯化钠磷酸缓冲液时，可阻止其中的水快速进入红细胞内，使溶血过程缓慢。但甘油与膜脂质又有亲和性，可使膜脂质减少。当红细胞膜蛋白及膜脂质有缺时，它们在pH6.85的甘油缓冲液中比正常红细胞溶解速度快，导致红细胞悬液的吸光度降至50％的时间（AGLT50）明显缩短。正常人AGLT50＞290s五、高渗冷溶血试验原理：最大溶血率66.5％～74.1％9mmol／L或12mmol／L蔗糖最大溶血率0.1％～16.9％7mmol／L蔗糖在高渗状态下，温度骤然变化影响红细胞膜脂质的流动性，并可能累及膜磷脂与膜骨架蛋白结合位点，红细胞容易破裂而发生溶血。当膜蛋白缺陷致膜表面积与体积比值降低，溶血率明显增加。而膜表面积与体积比值增加，溶血率降低。高渗冷溶血试验（hyperosmoticcoldhemolysistest）即测定红细胞在不同浓度的高渗缓冲液中，从37℃水浴立即置于0℃水浴一定时间的最大溶血率。2、参考值：遗传性球形红细胞增多症明显增加。珠蛋白生成障碍性贫血和异常血红蛋白病明显降低。自身免疫性溶血性贫血基本正常。3、临床评价：六、红细胞膜蛋白电泳分析原理：将制备的红细胞膜样品进行SDS－PAGE(SDS-聚丙烯酰胺凝胶)电泳，根据样品中各蛋白相对分子质量的不同，分离得到红细胞膜蛋白的电泳图谱，从而可见各膜蛋白组分百分率。各种膜蛋白组分百分率变化较大，多以正常红细胞膜蛋白电泳图谱作比较；或以带3蛋白为基准，各膜蛋白含量以与带3蛋白的比例表示。许多溶血性疾病常见红细胞膜蛋白异常。各种膜缺陷疾病如遗传性球形红细胞增多症有收缩蛋白等含量减低或结