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实验二、纸层析法分离鉴定氨基酸一、目的：
学习并掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的原理和方法。将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。如图12在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的Rf值是常数，因此可作为定性依据。01由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本实验利用纸层析法分离氨基酸。02在层析缸中装入展层剂，其高度约1.5～2cm。准备滤纸:戴上手套，取层析滤纸（长22cm、宽14cm）一张，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号，为点样位置（即原点），如图。注意事项：手不能直接接触滤纸；直线与底边平行。点样：用毛细管依次将Lys(赖)、Gly(甘)、Pro(脯)、Val(缬)、Leu(亮)和混合样品分别点在这6个位置上，点样点干后再点一次。注意每点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm。123三、操作LysGlyProValLeu混合样品纸层析点样标准图展层：将点好样的滤纸(点样面朝外)卷成筒状，用透明胶纸粘接或用线缝好，纸的两边不能接触。将滤纸直立于层析缸中（注意：点样的一端在下，展层剂的液面需低于点样线1cm，滤纸勿与缸壁接触），盖好层析缸盖，进行展层。待溶剂上升15～20cm时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干。01显色：?用喷雾器均匀喷上0.1％水合茚三酮正丁醇溶液，然后用电吹风吹干即可显出各层析斑点。02卷成筒状的滤纸氨基酸显色后的图谱溶剂前沿XY*
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