血型的鉴定方法及操作.pptVIP

反应条件：生理盐水介质，室温，肉眼可见凝集反应01平板法，试管法，微孔板法，试管离心法最可信赖。02应用：ABO血型定型、RhD抗原定型（IgG+IgM，IgM单克隆抗体），交叉合血03结果判断注意事项（一）：标准血清：健康壮年人混合血清，培养细胞株的单克隆抗体要求：高效价：抗A、抗B≥1：128高亲和性：15s内出现凝集，3min后凝集块1mm2单克隆抗体具有检出A2，A2B的能力冷凝集素效价1：4无菌，病毒灭活红细胞试剂：三个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤三次。红细胞悬液不能过浓或过淡，5%生理盐水红细胞悬液0102注意事项（二）：注意事项（三）：所有器材清洁干燥一般先加血清，后加红细胞反应温度：IgM抗体反应最适温度为40C，为防止冷凝集素干扰，采用室温，370C反应减弱离心时间和速度：3000g,30s反定型不宜用玻片法结果核对，避免笔误正、反定型结果一致才能报告，否则查找原因操作技术上的错误：主要原因离心过度或不足细胞与血清反应比例不适当阳性反应产生溶血现象而未能识别漏加试剂、结果判读错误等正反定型不一致的可能原因（一）：某些白血病患者和难治性贫血等导致ABO抗原减弱；1亚型红细胞抗原性弱，难以检出；3免疫系统尚未健全的新生儿、4月~6月内婴儿、抗体水平下降的老人；2低丙种球蛋白血症患者，血清定型时不凝集或弱凝集。4出现假阴性的常见原因：正反定型不一致的可能原因（二）：正反定型不一致的可能原因（三）出现假阳性的常见原因：红细胞出现多凝集现象；严重肠道革兰氏阴性杆菌感染，可使红细胞获得类B现象；异常的血浆蛋白升高、白蛋白/球蛋白异常，高浓度纤维蛋白原造成假凝集现象；待检血清中有不规则抗体存在；右旋糖酐、静脉注射某些造影剂等引起红细胞类似凝集。03玻片法：适合大规模血型普查，反应时间长，有时漏掉弱反应，反定型不适合。02试管法：需时短，离心增强凝集，可发现亚型和较弱的反应，正、反定型皆适合01简单，灵敏度低，只适合IgM抗体方法学评价2.酶介质法（enzymicmediumtest）：原理和方法：主要用于Rh血型鉴定（IgG抗体）蛋白水解酶增强IgG抗体的凝集作用注意事项：Rh血型不需作反定型每次实验均需作阳性、阴性对照方法学评价简单经济稳定性、准确性较差，不能检出MN、Duffy血型系统3.抗人球蛋白实验（Coomb’stest）原理和方法抗IgG待测红细胞+抗RhD（IgG）+抗人球蛋白红细胞凝集红细胞血型系统及其检测重庆医科大学临床血液教研室血型的发现1900年，ABO血型系统1940年，Rh血型系统KarlLandsteiner狭义地讲，存在于红细胞上的特异性同种抗原。1广义地讲，是人类遗传多态性的一种表现，血液中各种成分都有其各自型别。2血型（bloodtype)1红细胞血型（系统，抗原）2是存在于红细胞上的化学结构，化学本质是糖和多肽，是红细胞膜上的跨膜蛋白。存在于红细胞膜上（完全抗原），也存在于上皮细胞以及各种体液和分泌液中（半抗原）。3RBC4存在于体液、分泌液中天然抗体、免疫抗体01规则抗体、不规则抗体02完全抗体，不完全抗体03同种抗体，自身抗体04红细胞血型抗体天然抗体：ABO血型系统中，A型个体血浆中天然存在抗B，B型个体血浆中存在抗A。多数天然抗体是IgM型，最佳反应温度为室温或更低。010102免疫抗体：一般通过输血、妊娠、注射三种方式接受抗原刺激，多数免疫抗体是IgG型，最佳反应温度是37oC。02天然抗体和免疫抗体天然抗体和免疫抗体特性比较Landsteiner规律：Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ规则抗体：ABO系统产生抗Ａ、抗Ｂ是有规律的。正常人血液中一般没有不规则抗体，又称为意外抗体（unexpectedantibody）。不规则抗体：除ABO系统外，其他系统产生的抗体均不符合上述规律。规则抗体和不规则抗体完全抗体和不完全抗体完全抗体：在盐水介质中能凝集红细胞抗体，多为IgM抗体。不完全抗体：能使红细胞致敏，但在盐水质中不能凝集红细胞，需要通过抗球蛋白法或其他非盐水介质法进行检测，多为IgG抗体。抗IgG同种抗体：针对患者缺乏的抗原所产生的抗体即为同种抗体，如Rh阴性者输血后产生的抗Ｄ抗体。0102自身抗体：针对自身抗原产生的抗体，如引起自身免疫型溶血性贫血。同种抗体、自身抗体ISBT（TheInternationalSocietyofBloodTran