诱导性多功能干细胞.pptVIP

Ips细胞的研究概况（两个相关实验）Ips细胞首先由科学家Takahashi和Yamanaka在2006年建立的。实验原理如下：利用逆转录病毒载体在小鼠成纤维细胞中导入了4个与多功能性有关的基因：Oct4,Sox2,c-myc和Klf4。利用多能性标志分子Fbx15的表达对转染后的细胞进行了筛选，最终的到了ips细胞，这种细胞的功能和性能几乎和胚胎干细胞一样。01另一个实验的对象是人类皮肤成纤维细胞的重编程，而实验的过程和上一个实验基本相同；。只是对所筛选的转录基因做了一下修饰：去掉了肿瘤相关因子c-Myc，使ips细胞的生产更加安全02日本科学家发现ES细胞中那个存在着一些因子，这些因子对于多能性的建立可能至关重要。科学家对24个与多能性维持相关的候选基因导入小鼠成纤维细胞中，依次去掉其中一个基因，最后在得到的10个基因中发现了4个至关重要的基因，其中任何一个缺失都将导致实验的失败，这4个基因中的任意2个或3个组合都无法形成具有ES细胞特性的ips细胞。从而确定了：Oct4,Sox2,c-myc和Klf4这4种基因人类ES细胞能够通过细胞融合实验室体细胞发生重编程。美国科学家比较了人类ES细胞和髓前体细胞的基因表达谱，挑选出许多在ES细胞和髓前体细胞的基因表达谱，挑选出许多在ES细胞中相对高表达的基因。再根据这些基因在多能性调控中的已知功能对其进行了排序，从中选出14个候选基因。将这些基因以不同的组合方式导入一种由人类ES细胞分化得到的间充质样细胞后，检验了不同基因的导入对这种细胞重编程的作用。最后锁定了4种因子：Oct4,Sox2,Nanog,Lin28.Ips细胞的筛选：主要有三种方法：形态学筛选、药物筛选和选用对多能性更为关键的基因作为报告基因。其中利用Fbx15对ips细胞进行筛选，原理是Fbx25对于多能性的维持和胚胎的发育来说是不可缺少的基因，所以Fbx25作为筛选ips细胞的报告基因。1仅利用形态学的标准来代替报告基因的筛选。Maherali等人发现，仅仅依靠形态学筛选可能就足以建立ips细胞系。后来的研究证实了在不对供体细胞做任何额外遗传修饰的情况下，仅依靠形态学筛选的标准对细胞进行筛选也能够分离出小鼠的ips细胞。2利用基因重组技术建立了具有药物抗性基因的体细胞，这些细胞的抗性受内源性Nanog或Oct4表达的调控。这两个基因的作用是维持细胞多能性，从而利用这种筛选的方法建立了稳定的ips细胞系，这些细胞系在各个方面都表现出了极为相似的特性。3iPS细胞的应用价值和发展方向诱导产生多能性干细胞的研究里程碑式的科学突破细胞重编程的研究概况核移植试验最初是在两栖动物中实现的，通过将体细胞核注入到去核卵母细胞中。迄今，人们已经获得了多种核移植动物，也建立了来源于核移植胚胎的胚胎干细胞系。体细胞核移植试验也具有很大的局限性STEP03STEP04STEP01STEP02克隆的效率极低产生的许多后代在各个阶段都体现出严重的发育异常由于需要卵母细胞，核移植实验在人类中的应用受到强烈的伦理学质疑这些不足，都制约了核移植技术的进一步发展和应用。将成熟的体细胞与多潜能的细胞（ES细胞、胚胎癌细胞等）融合，或者用胚胎干细胞提取物来处理体细胞，也可以在一定程度上使体细胞发生重编程。利用这两种方法，可以实现某些多功能性标志分子的重新表达和多种分化潜能的获得。但是，体细胞与多能性细胞的融合率较低，融合之后的细胞具有两套染色体，并且在移植后会发生排斥现象，这就制约了细胞融合的临床应用。2006年11月20日，日本京都大学的山中伸弥（ShinyaYamanaka)和美国威斯康星大学的詹姆斯·汤姆森（JamesThomson）分别在《细胞》和《科学》杂志上发表重量级论文，宣布他们用基因改造的手段，将人类体细胞改造成了类胚胎干细胞，在功能上几乎可以和胚胎干细胞相媲美。詹姆斯·汤姆森小组的论文发表在11月20日的《科学》杂志上俞君英是11月20日《科学》杂志论文的第一作者2006年8月，日本科学家山中伸弥小组首先在小鼠身上取得成功2006年，Takahashi和Yamnaka将几个转录因子导入已分化的小鼠皮肤成纤维细胞，进而获得了类似于胚胎干细胞的多能性干细胞，称之为“诱导产生的多功能性干细胞”（inducedpluripotentstemcells,iPS细胞）。这一研究明确地证实了分化的细胞可以通过少数几个因子的外源导入而被重编程到具有多能性的状态，因而受到了整个生命科学领域的广泛关注。在研究诱导多功能性干细胞产生的原理机制之前，先了解一下体细胞重编程逆转为干细胞的研究进展体细胞重编程的过程体细胞重编程的原理体细胞不经过胚胎逆转为多能干细胞