酶类药物的分析.ppt

*测定法：取呈直线的吸收度，按下式计算：P为每mg供试中含胰蛋白酶的量，U；A1为直线上终止的吸收度；A2为直线上开始的吸收度；T为A1至A2读数的时间，min；W为测定液中供试品的量，mg；吸收度每分钟改变0.003，即相当于1个胰蛋白酶单位。第30页，共58页，星期日，2025年，2月5日*2、胰弹性蛋白酶胰弹性蛋白酶：为肽链内断酶，存在于哺乳动物胰脏。弹性酶用于治疗高血脂症、动脉粥样硬化和脂肪肝。胰弹性蛋白酶是由240个氨基酸组成的单一肽链，有四对二硫键。分子量为25900，等电点为pH9.5。胰弹性蛋白酶除水解弹性蛋白外，还可以水解血红蛋白、酪蛋白等蛋白。刚果红－弹性蛋白。第31页，共58页，星期日，2025年，2月5日*原理刚果红－弹性蛋白法：以刚果红－弹性蛋白为底物，由于刚果红－弹性蛋白酶结合的共价键能被弹性酶水解，根据刚果红在495nm处有最大吸收，由标准曲线即可查得弹性酶单位数。单位：20分钟水解1mg刚果红－弹性蛋白所需的酶量为一个弹性酶活力单位。第32页，共58页，星期日，2025年，2月5日*方法:第33页，共58页，星期日，2025年，2月5日*3、尿激酶由人尿中分离提纯后制得的一种碱性蛋白水解酶。主要作用是激活人体内纤维蛋白溶解酶原使其成为有活性的纤维蛋白溶酶，从而解聚血纤维蛋白，溶解血栓。天然尿激酶的分子量为54000，其作用于纤维蛋白溶解酶原的赖氨酸或精氨酸键使其裂解成纤维蛋白溶解酶。第34页，共58页，星期日，2025年，2月5日*效价测定原理(气泡上升法)尿激酶激活人体内纤维蛋白溶解酶原使其转化成纤维蛋白溶酶；纤维蛋白原在凝血酶的作用下，转变成纤维蛋白凝块，此凝块在纤维蛋白溶酶作用下，水解为可溶性小分子多肽。在纤维蛋白溶酶原过量的情况下，尿激酶量与纤维蛋白凝块的溶解时间的对数成直线关系。第35页，共58页，星期日，2025年，2月5日*操作试管中加纤维蛋白原溶液0.3ml（37℃水浴）标准品溶液1.0ml加混合溶液0.4ml立即摇匀计时，反应系统应在30～45秒内凝结，当凝块内小气泡上升到系统体积一半时作为反应终点。以尿激酶的浓度为横坐标，以反应时间的对数为纵坐标。第36页，共58页，星期日，2025年，2月5日*二、脂键水解酶－胰脂肪酶胰脂肪酶是一种水解酶，在一定条件下把甘油三脂类脂肪逐步水解，最后生成甘油及相应的脂肪酸。底物:橄榄油pH指示连续滴定法：稳定pH条件下避免因pH值改变而引起酶活力的改变。用已知浓度的标准碱溶液滴定，可定量地测定脂肪酸的量，从而得知脂肪酶活力。第37页，共58页，星期日，2025年，2月5日*测定第38页，共58页，星期日，2025年，2月5日*计算每分钟水解橄榄油产生1μmol脂肪酸的酶量，为1个活力单位。每克含有的胰脂肪酶单位A:供试品消耗NaOH（0.1mol/L）的体积B:空白消耗NaOH（0.1mol/L）的体积W:供试品取样量（g）N:供试品稀释倍数。第39页，共58页，星期日，2025年，2月5日*三、糖苷键水解酶－溶菌酶蛋清中提取的能分解粘多糖的碱性水解酶。主要作用于革兰氏阳性菌，使胞壁中的肽聚糖分解导致细菌溶解。溶菌酶具有抗菌、抗病毒等作用。溶菌酶分子量为14000～15000，由129个氨基酸残基组成，等电点为10.0~11.1。溶菌酶属糖苷水解酶，能以某些细菌细胞中的多糖为底物。第40页，共58页，星期日，2025年，2月5日*效价测定－比浊法以溶酶小球菌为底物，主要成分为粘多糖，粘多糖由NAG和NAM重复而成。溶菌酶水解专属性强，它只能水解NAMC1和NAGC4之间的β－1，4糖苷键。溶酶小球菌胞壁中的粘多糖经过溶菌酶的水解作用后，菌体因渗透压不平衡，导致溶菌，溶液的吸收度下降。在一定的条件下，每分钟吸收度下降0.001为一个酶活力单位。第41页，共58页，星期日，2025年，2月5日关于酶类药物的分析*第1页，共58页，星期日，2025年，2月5日*

第一节概述在生物体内，酶能降低生化反应活化能，加快可逆反应的进行速度，使之尽快达到平衡。一、酶的特性二、酶的分类三、酶的化学组成四、酶的催化反应机制五、酶催化反应动力学第2页，共58页，星期日，2025年，2月5日*一、酶的特性1．酶是高效催化剂。2．酶对底物的结构具有严格的选择性。（1）相对专一性：（2）绝对专一性:（3）立体异构专一性:3．酶催化反应的反应条件温和。4．酶的催化活性在生物体内受多种因素的调节。第3页，