细胞工程之核移植技术与动物克隆.ppt

核受体细胞选择：去核卵母细胞常常作为核移植的受体细胞。选择的生物学依据(或为何选择卵细胞为核移植受体细胞)：(1)核受体细胞的准备20在卵母细胞的细胞质含有某种特定的因子，可以使移植核中所含有的基因表达程序发生重新排列。使已经分化了的细胞重新回到发育过程的原点，同受精卵一样开始个体发育过程。第20页，共40页，星期日，2025年，2月5日卵母细胞的来源：用激素对雌体进行超排处理，从输卵管冲出体内成熟的MII卵母细胞。从屠宰场收集卵巢，吸出滤泡中的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)，在体外培养成熟后作为受体。冷冻保存的卵母细胞(1)核受体细胞的准备21第21页，共40页，星期日，2025年，2月5日卵母细胞的去核处理：(1)核受体细胞的准备22将MII卵母细胞置于含细胞松弛素(5-7.5ug/mL)的培养液处理10-20min.显微镜下以持卵管吸住卵母细胞.以尖端去核针刺穿透明带，吸出第一极体和极体下1/3胞质.第22页，共40页，星期日，2025年，2月5日供体细胞核具备的条件：必须是完整的二倍体，保持有供体动物完整的基因组供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下，产生细胞分化过程的逆转，能重新完成从受精到发育成一个正常动物个体的全过程。(2)核供体细胞的准备23第23页，共40页，星期日，2025年，2月5日供体细胞类型：胚胎卵裂球细胞体细胞胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞(2)核供体细胞的准备24第24页，共40页，星期日，2025年，2月5日(3)细胞核移植胞质内注射透明带下注射25胞质内注射是用一个外径5～8μm的注核针吸取供体核后直接注射进卵母细胞胞质内把供体细胞核注射在透明带与卵母细胞之间的卵周隙中，核移植后用电刺激进行细胞融合第25页，共40页，星期日，2025年，2月5日固定针对准极体部位，将卵母细胞固定，去核微吸管对准极体插入透明带，将极体和部分细胞质吸入吸管中26第26页，共40页，星期日，2025年，2月5日吸管拉出时，细胞膜被拉长形成一个桥，吸管脱离透明带，质膜被掐断，挤推出管中的极体和细胞质27第27页，共40页，星期日，2025年，2月5日体外受精卵形成的8细胞牛胚胎经透明质酸处理后，分离出8枚分裂球，吸取细胞核28第28页，共40页，星期日，2025年，2月5日第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日Wilmutetal.1997,Science（1996.6诞生）2第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日什么是克隆**？克隆(Clone)***有两个方面的含义：一是指用无性方式进行无性繁殖的技术。二是指经过无性方式繁殖所得到的后代群体。J.B.S.Haldane，1963，“人类种族在未来二万年的生物可能性”的演讲上采用“克隆(Clone)”的术语。Clone起源于希腊文“Klone”，原意是用“嫩枝”或“插条”繁殖。3第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日什么是克隆**？克隆的生物范畴分子克隆：如基因克隆细胞克隆：如杂交瘤细胞克隆动物克隆：包括核移植技术（核心）卵裂球培养胚胎分割技术4第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日什么是动物克隆？动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。基本手段或步骤：1.获得“供体细胞的细胞核”：早期胚胎细胞、成年体细胞2.获得无核卵母细胞。3.将目标细胞核经显微手术移植到去核卵母细胞中4.适当的条件下，移植卵母细胞重新发育成正常胚胎。5.胚胎被移植到适当母体中，获得与供核个体遗传性状已知的个体。5第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日第1节核移植技术6第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日核移植技术就是利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物(新品种)的一项技术。一、核移植技术***（Nucleartransfer）概念：7第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日1.核移植技术的类型一、核移植技术（Nucleartransfer）胚胎细胞核移植干细胞核移植体细胞核移植类型8