血红蛋白的提取与分离课件.pptVIP

垂直板电泳装置加样样品迁移方向电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。添加标题混合样品添加标题带孔胶添加标题按分子大小分离添加标题电泳方向添加标题电泳添加标题小分子添加标题大分子添加标题电泳缓冲液电泳缓冲液分子量小分子量大电源夹在两块玻璃板之间的凝胶加在槽中的经SDS处理的样品标准蛋白分子量未知蛋白在一定的凝胶浓度下，多肽链分子量的对数与多肽链的相对迁移率成线性关系，所以可以通过标准曲线求未知多肽链分子量。相对迁移率电泳后的凝胶径考马斯亮篮染色、脱色后的凝胶照片说明聚丙烯酰胺凝胶电泳对分离大分子具有较高的分辨率，但核酸比蛋白质分子大得多，只能采用较大孔径的琼脂糖凝胶电泳。核酸分子本身含有大量的磷酸根，核酸带负电荷，在电场中向正极移动。溴化乙啶荧光染料对核酸染色在紫外线的照射下，发出橙红色荧光。根据荧光条带的粗细和分布的位置，可以用在对PCR扩增效果的鉴定上。思考凝胶层析和SDS的原理有那些相似性第一章节二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：1.样品处理水分固体物质血浆蛋白无机盐磷脂葡萄糖等血液血浆血细胞白细胞血小板红细胞（最多）血红蛋白（）两个α-肽链两个β-肽链样品处理—粗分离—纯化—纯度鉴定90％????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????①目的：去除（），以利于后续步骤的分离纯化。②方法：（）离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果），然后用胶头吸管吸出上层透明的（），将下每条肽链环绕（），此基团可携带（）。血红蛋白因含有（）而呈红色。一个亚铁血红素基团一分子氧或一分子CO2血红素(1)红细胞的洗涤杂蛋白低速短时间黄色血浆1.样品处理生理盐水01040203层（）的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的（）（质量分数为0.9％的氯化钠溶液），缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤（）次，直至上清液中没有（），表明红细胞已洗涤干净。三黄色暗红色(2)血红蛋白的释放加（）到（）体积，再加40％体积的（）（溶解细胞膜），置于（）上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。原血液磁力搅拌器分离血红蛋白溶液：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10min，试管中的溶液分为4层:甲苯蒸馏水123456第1层（最上层）：（）甲苯层第2层（中上层）：（）的沉淀层，（）色薄层固体第3层（中下层）：（）的水溶液层（）的液体第4层（最下层）：其它杂质（）的沉淀层无色透明脂溶性物质白血红蛋白红色透明暗红色用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。有机溶剂脂类物质血红蛋白溶液红细胞破碎物沉淀取1mL的血红蛋白溶液装入（）中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为20mmol/L的（）中，pH为（），透析12小时。目的是（