大肠杆菌K88相关产品的研制.pptx

;大肠杆菌口服疫苗的研制;Whatisvaccine？;Whatisoralvaccine？;Whychoosetheoralvaccine？;WhydowechoosetheE.Coli?;;WhyistheK88?;HowtopreventandtreattheE.Colidisease?;一、鸡抗猪产肠毒素大肠杆菌（K88）卵黄抗体的研制;Whydowechooseyolkantibody（IgY）?;Researchmathods;名称;;3、疫苗的乳化

将配制好并高压灭菌的油相佐剂与灭活的菌液按照1:1的比例混合，并用匀浆仪乳化，乳化期间不定时抽样检测疫苗的乳化效果乳化好的灭活疫苗呈乳白色牛奶状，滴入清水中时不溶解，不扩散，不沉淀。;4、预接种实验

为了检验动物实验设计的科学性和可行性，避免设计不周造成浪费，我们设计了预实验。预实验证明以6×109cfu的量免疫效果最好，免疫鸡群一开始出现应激反应，采食量下降、精神抑郁，趴卧不起。接种一周后鸡群恢复正常，没有出现实验鸡只死亡。

;免疫170日龄待开产鸡，鸡群分为2组，每组100只，一组为对照组，一组为实验组。

1、首免每羽注射1.0mL。

2、两周左右进行二免，方法同初免，每羽注射1.5ml。

3、四周后进行三免，方法同初免，每羽注射2.0ml。

4、每周收集卵黄液，采用试管直接凝集法进行卵黄液中卵黄抗体效价的测定。;样品编号;免疫鸡群的抗体效价变化;收集免疫鸡10~13周产的鸡蛋，进行喷干工艺的摸索，最后确定喷干时进口温度设定为160℃，出口温度设定为90℃，对卵黄抗体滴度无影响，并且易于操作。;指标;9、小鼠造模饲喂试验;10、k88卵黄抗体的断奶仔猪饲喂试验;对照组的腹泻率最高为16.49%显著高于2个试验组，这表明合用IgY对有效降低仔猪断奶后腹泻的发生，且在合理范围内随着剂量的增加其腹泻效果越好。但是综合料重比，腹泻造成的死亡率等数据来看，基础日粮+1%的k88卵黄抗体粉可以收到最佳的效果;

考虑到实际生产中，导致仔猪腹泻的情况较为复杂，不只是大肠杆菌K88粘附素，因此我们有做了进一步的工作调整，将携带K88、K99、987P、F41、F18菌毛抗原的几种大肠杆菌还有伤寒沙门氏菌联合在一起制成了大肠杆菌沙门氏菌二联5价卵黄抗体。

;二、携带猪源产肠毒素大肠杆菌(k88)抗原基因的口服乳酸菌疫苗的开发及应用;实验??、重组乳酸菌的PCR鉴定及表达产物的

SDS和West-blot分析;重组菌活化、增菌及质粒的提取;1、重组乳酸菌的分子鉴定—PCR鉴定;重组菌活化、增菌及质粒的提取;2大肠杆菌和乳酸菌发酵产物免疫印迹（West-bloting）结果;实验二、乳酸工程菌诱变选育及工业化生产条件的摸索;重组菌的紫外诱变;1重组乳酸菌的诱变选育;1.2、重组乳酸菌的选育;2重组乳酸菌选育株对小鼠肠粘液的体外粘附实验;3选育株的遗传稳定性实验;重组菌的紫外诱变;应用生产常用的发酵条件和培养基，没再单独进行优化实验，

做好种子液后加到500L发酵罐中，发酵12h后，再转入5吨的

发酵罐，每2h取一次样，进行乳酸菌计数和pH值的测定，

并绘制生长曲线。;1选育株的生长曲线测定;2选育株的菌液PH值变化情况测定;实验三、重组乳酸菌作为口服疫苗对小鼠免疫

指标的影响及免疫保护效果的研究;;1小鼠脾脏指数（mg/kg）测定结果;2小鼠肠道内容物sIgA（mg/L）测定结果;3血清中大肠杆菌k88抗体含量的OD值测定结果

（大肠杆菌包被）;4小鼠肠道内的乳酸菌和大肠杆菌计数结果（log2）;结果表明：

1、在非特异性免疫方面，使用重组乳酸菌对小鼠生长初期的脾脏指数和小鼠肠道内sIgA的分泌有持续的促进作用；

2、在特异性免疫方面，重组乳酸菌的效果相比自制的大肠杆菌疫苗效果更加持久，能长时间刺激机体产生高水平的大肠杆菌K88抗体。;实验四、重组乳酸菌选育株作为口服疫苗对断奶仔猪饲喂效果的研究;4.1重组乳酸菌对断奶仔猪粪便中sIgA含量的影响;4.2重组乳酸菌对断奶仔猪肠道大肠杆菌数的影响;-10.9%;结论;;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。10月-2010月-20Sunday,October11,2020

10、人的志向通常和他们的能力成正比例。09:09:2909:09:2909:0910/11/20209:09:29AM

11、夫学须志也，才须学也，