高二生物选修动物的克隆.ppt

第1页，共33页，星期日，2025年，2月5日思考与回忆：1、动物细胞全能性特点？随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，可以伴随一定的组织分化；但是不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，培养物的组织成分也发生结构功能变异，结果长期的培养过程只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。3、动物的细胞和组织培养的理论依据（原理）？细胞增殖一、动物克隆的技术基础：

动物的细胞和组织培养第2页，共33页，星期日，2025年，2月5日在细胞培养的过程中，结构和功能的变化第3页，共33页，星期日，2025年，2月5日1、动物细胞、组织培养动物细胞培养：将动物部分组织在体外经过机械消化或胰蛋白酶消化，分散成单个细胞；然后在人工控制的培养条件下，使细胞得以生存，保持生长、分裂、衰老、正常死亡等。细胞之间存在着一定程度的组织特性。动物组织培养：动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。动物组织培养过程中可以伴随组织分化，但由于细胞结构与功能的变化，最终还是成了简单的细胞培养。动物细胞培养、动物组织培养、动物器官培养统称为广义上的组织培养（组培）。第4页，共33页，星期日，2025年，2月5日小资料无菌、无毒环境适宜的温度—人和哺乳动物细胞最适温度为35－37℃。气体和适宜的酸碱度—需要一定量的O2等pH7.2-7.4适宜的渗透压营养物质——特定的培养基培养细胞的生存环境第5页，共33页，星期日，2025年，2月5日主要有：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等培养液（液体培养基）的成分血清如：小牛血清等血浆如：鸡血浆等组织浸出液可用鸡胚胎浸出液,水解乳蛋白由乳白蛋白质经水解得到淡黄色粉末,一般可配制成0.5%溶液.天然培养基小资料第6页，共33页，星期日，2025年，2月5日根据细胞的生理生化代谢特点,人工配制而成,为细胞提供一个近似体内生存环境,又便于控制和标准化操作基本成分各种碳水化合物(糖)、氨基酸、维生素、无机盐、生长因子、激素等常用培养液几十种人工合成培养基小资料1950，“199”研制成功第7页，共33页，星期日，2025年，2月5日分散成单个细胞原代细胞传代细胞剪碎胰蛋白酶原代培养传代培养培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官(细胞来源)第8页，共33页，星期日，2025年，2月5日定义从新鲜供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养.胰蛋白酶处理取出组织胚胎或幼龄动物剪碎组织细胞游离加培养液培养瓶内贴壁生长长成单层细胞原代培养过程图示第9页，共33页，星期日，2025年，2月5日细胞贴壁过程第10页，共33页，星期日，2025年，2月5日细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止。接触抑制第11页，共33页，星期日，2025年，2月5日定义当原代培养的细胞处于接触抑制后,用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.传代培养第12页，共33页，星期日，2025年，2月5日细胞系有限细胞系2N连续细胞系（异倍体核型）不致癌保持接触抑制致瘤恶性细胞系细胞株有限细胞株连续细胞株泛指可传代的细胞，用单层培养法得以建立很多细胞系具有特殊性质的细胞系，如恒定的染色体组、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性等。2、细胞系、细胞株第13页，共33页，星期日，2025年，2月5日3、克隆培养法（细胞克隆）最基本要求：保证分离出的细胞是一个而不是多个连续细胞系、肿瘤细胞的克隆易于原代细胞、有限细胞系提高细胞克隆形成率的措施:主要用途：从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系1948年，Sanford创建了单细胞分离培养法（克隆培养法）从原代培养或从细胞系中选出具有特定的生物学性质的细胞群，称细胞株。应用这一技术可以建立遗传性状相同的克隆细胞株。第14页，共33页，星期日，2025年，2月5日动物组织培养技术的发展19世纪，萌芽。1885，鸡神经板在生理盐水中培养成功1903年，在腹水及血清中培养皮肤及白细胞