细菌染色和涂片观察的方法.ppt

革兰氏阴性弧菌例子第23页，共49页，星期日，2025年，2月5日革兰氏阳性产芽孢杆菌例子第24页，共49页，星期日，2025年，2月5日革兰氏阳性短杆菌例子(李斯特菌x1000)第25页，共49页，星期日，2025年，2月5日革兰氏阴性弯曲菌例子第26页，共49页，星期日，2025年，2月5日革兰氏阳性棒状杆菌例子第27页，共49页，星期日，2025年，2月5日革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件、操作技术及菌龄等有密切的关系。培养基成分：在缺乏镁盐的培养基中，革兰氏阳性菌可变为革兰氏阴性菌。培养条件：在酸性环境中细菌带正电荷。操作技术：如涂片太厚影响酒精脱色，革兰氏阴性菌则可染成革兰氏阳性菌；脱色时倘酒精作用时间太长，革兰氏阳性菌又会染成革兰氏阴性菌。菌龄：菌龄也能影响染色的结果，这和细菌生长过程中核酸含量的改变有关。例如本是革兰氏阳性的老龄菌，因核酸减少则常有许多菌细胞变为革兰氏阴性。第28页，共49页，星期日，2025年，2月5日革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量较多，脂类较少，与95%酒精接触后可迅速导致细胞壁脱水，通透性降低，使在细菌细胞内着色的染料——结晶紫与碘的复合物不易透出，所以保留了紫色。而革兰氏阴性菌细胞壁含肽聚糖较少、脂类较多，与95%酒精接触后肽聚糖脱水不明显，而脂类被酒精溶解后使细胞壁通透性增加，酒精易透入菌体内溶解染料——碘复合物并使其透出，因而使紫色被洗脱后又被染成红色。第29页，共49页，星期日，2025年，2月5日3）、革兰氏染色法的临床意义①、鉴别细菌：该染色法可将细菌分为GP菌与GN菌两大类，这样可以初步识别细菌、缩小范围，便于进一步鉴定。②、了解细菌与致病性的关系：大多数GP菌的致病物质主要为外毒素；而大多数GN菌的致病物质主要为内毒素。通过革兰氏染色，可了解细菌的致病物质，从而做出相应的治疗对策。第30页，共49页，星期日，2025年，2月5日③、选择抗菌药物：GP菌和GN菌在细胞壁等结构上有很大差别，因而对抗菌药物的敏感性不同。如大多数GP菌对青霉素、红霉素、头孢菌素等敏感；而大多数GN菌对这几种抗生素不敏感，但对链霉素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等敏感，故临床上可根据病原菌的革兰氏染色性，选择有效的药物进行治疗。第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日2、抗酸染色法有些细菌如结核杆菌、麻风杆菌等分枝杆菌，用一般染色法不易着色，必须使用强染色剂（如石炭酸复红）并采用加热和延长染色时间的方法才能使其着色。且一旦染上颜色后又不易被酸性酒精脱色。这种能够抵抗酸性酒精脱色的细菌，称为抗酸杆菌。应用这种原理进行染色的方法叫抗酸染色法。抗酸染色法常用的有萋—纳二氏染色法和潘本汉氏染色法。第32页，共49页，星期日，2025年，2月5日①染色的步骤：

直接涂片法第33页，共49页，星期日，2025年，2月5日夹层杯液基集菌法：第34页，共49页，星期日，2025年，2月5日固定——→初染——→脱色——→复染石炭酸复红加热3%盐酸酒精吕氏美兰第35页，共49页，星期日，2025年，2月5日第1页，共49页，星期日，2025年，2月5日第一节?不染色标本检查法所谓不染色标本检查法是将细菌标本不经染色直接镜检，从而观察生活状态下细菌的形态及运动状况的一种检查方法。这种检查方法虽可看到细菌的大致轮廓，但主要用于观察细菌的动力。第2页，共49页，星期日，2025年，2月5日一、不染色标本检查法的具体方法1、压滴法2、悬滴法3、毛细管法第3页，共49页，星期日，2025年，2月5日第二节?染色标本检查法所谓染色标本检查法是用特殊的手段对细菌进行染色，而后再检查其形态、大小、排列方式、染色反应以及特殊结构的一种检查方法,有助于细菌的初步识别或诊断。第4页，共49页，星期日，2025年，2月5日?细菌染色的一般程序细菌染色的基本程序是：涂片→固定→（媒染）→染色→（脱色）→（复染）第5页，共49页，星期日，2025年，2月5日1、涂片制备：

随标本的种类而略有不同。一般临床标本大多可直接涂抹于洁净载玻片上；培养的细菌，若为液体培养液，亦可直接涂于载玻片上；若为固体培养基上的细菌，则先取一接种环生理盐水于载玻片中央，然后从培养基上取菌少许，在盐水中研磨均匀，使呈轻度乳浊，以接种环扩成1cm2或2份硬币大小的涂面，在室温下自然干燥或放在火焰上方的热空气中慢慢烘干。但切忌紧靠火焰烤干。第6页，共49页，星期日，2025年，2月5日2、固定：染色前必须先行固定。其目的在于凝固