血清CK及其同工酶测定检验系生化.ppt

血清CK及其同工酶测定

检验系生化一、概述肌酸激酶（Creatinekinase，CK，EC2.7.3.2）全称腺苷三磷酸：肌酸N-磷酸转移酶，催化肌酸（Cr）和ATP或磷酸肌酸（CrP）和ADP之间磷酸转移的可逆反应。肌酸+ATP磷酸肌酸+ADP+H+01CK02偏碱pH有利于顺向反应进行，中性pH倾向逆向反应，一般逆向反应较顺向反应快2~6倍；Mg2+是CK的必需激活剂，但过量反而抑制；样品宜用血清或肝素化血浆；标本应避免严重溶血；血清中CK较不稳定，室温4h或4℃12h可使酶失活。二、CK测定方法01比色法02紫外分光光度法03荧光法比色法利用顺向反应测磷法CrP在酸液中易水解成Cr及无机磷酸。（ATP与ADP在酸性条件下较稳定）2、酶偶联-丙酮酸测定法肌酸+ATP磷酸肌酸+ADPADP+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸+ATP丙酮酸+2，4-二硝基苯肼丙酮酸-2，4-二硝基苯腙CK丙酮酸激酶5%55%30%10%顺向反应测定CK的底物较便宜；丙酮酸激酶价格较贵，不易获得；测磷法的试剂较易得而稳定；顺向反应速度较慢，灵敏度较低。利用逆向反应CKCrP+ADPCr+ATPCr+双乙酰+α-萘酚红色化合物Mg2+作激活剂；半胱氨酸供给巯基；氢氧化钡和硫酸锌沉淀蛋白并终止反应。逆向反应的速度较快，敏感性较高，成为目前国内推荐的主要方法。01必须用中性或偏碱的蛋白沉淀剂以防止底物CrP在酸性蛋白沉淀剂中非酶性水解成Cr。02紫外分光光度法多利用逆向反应，是国际最常用方法CrP+ADPCr+ATPATP+GluADP+6-P-Glu6-P-Glu+NADP+6-P-GA+NADPH+H+单击此处添加小标题CK单击此处添加小标题己糖激酶单击此处添加小标题6-PD单击此处添加小标题单击此处添加小标题全部反应最适pH为6.8~6.9；单击此处添加小标题主要干扰因素谷光甘肽还原酶腺苷酸激酶荧光法利用逆向反应生成的Cr在强碱性溶液中与茚三酮反应产生荧光复合物，测其荧光强度，经与同样处理的Cr标准管比较，可计算CK活力。优点：快速、敏感，巯基化合物不产生干扰，试剂易得，操作条件易于掌握。缺点：需精密荧光分光光度计，不适宜基层单位使用。酶偶联-丙酮酸测定法步骤（顺向反应）空白标准测定H2O0.1血清0.1标准0.1酶试剂0.50.50.537℃，10minDNP0.50.50.537℃，15min0.4NNaOH444室温5min，440nm比色计算：Au/As×200U/L第一章