蛋白质的生物合成及其在细胞内的降解.pptVIP

使用NC滤膜过滤放射性在滤出液滤膜19AAs+[14C]-Phe+aaRSs使用NC滤膜过滤放射性留在滤膜上滤膜标准的遗传密码表遗传密码的主要性质简并与兼职密码子的选定不是随机的通用和例外不重叠无标点同一种氨基酸的不同密码子使用的频率不尽相同12线粒体内遗传密码的例外摆动规则摆动规则由Crick于1966年提出，用来解释一种tRNA反密码子如何能够识别一种氨基酸的几个同义密码子以及某些含有稀有碱基（如次黄嘌呤）的反密码子是怎样识别由正常碱基构成的密码子的现象。该规则的内容是：密码子在与反密码子之间进行碱基配对的时候，前两对碱基严格遵守标准的碱基配对规则，第三对碱基则具有一定的自由度。但并非任何碱基之间都可以配对，当反密码子第一位碱基是A或C者，只能识别一种密码子；第一位碱基是G或U者，则能识别两种密码子；第一位碱基是I者，则能识别三种密码子。摆动规则的意义在于使得在翻译的过程中，tRNA和mRNA更容易分离。摆动规则反密码子第一个碱基密码子第三个碱基ACGUIUGC、UA、GA、C、U在核糖体上同源tRNA的

识别是诱导契合的过程以细菌为例，在A部位上同源tRNA与mRNA的结合诱导A1492和A1493从16SrRNA螺旋44的内部环中被挤出来，同时还造成通用保守的G530从原来的顺式构象编成反式构象。在新的构象之中，A1493和A1492分别与密码子/反密码子的前两个碱基对螺旋相互作用，而G530同时与反密码子的第二个位置和密码子的第三个位置相互作用。这些构象诱导变化的结果是密码子/反密码子的前两个碱校对受到核糖体的检查，以区分正确的Watson-Crick碱基对和错配的碱基对，而“摇摆”位置似乎能够容忍摆动规则允许的碱基对。大肠杆菌在翻译的五个阶段所必需的主要成分翻译的详细机制4步骤反应：氨基酸的活化起始延伸终止和释放细菌的蛋白质合成氨基酸的活化fMet-tRNAfMet的形成其他氨酰-tRNA的形成起始阶段起始密码子的识别起始复合物的形成延伸阶段：在起始复合物形成以后，翻译即进入延伸阶段，延伸阶段所发生的主要事件是进位、转肽和移位且不断的循环。多肽链合成的终止与释放细菌翻译系统起始密码子的识别主要是依赖于mRNA5′端的SD序列与16SrRNA3′端的反SD序列之间的互补配对。1SD序列位于起始密码子上游约7个碱基的区域，由4~5个碱基组成，富含嘌呤碱基，它是由JohnShine和LynnDalgarno在1974年，通过比较多种原核细胞蛋白质mRNA的5′端核苷酸序列之后总结出来的。在16SrRNA3′端有一段富含嘧啶碱基的序列，可以和SD序列互补配对，因而被称为反SD序列。2许多实验证明，正是SD序列与反SD序列的互补关系，才使得位于mRNA的SD序列下游的第一个AUG用作起始密码子。3起始密码子的识别SD序列和反SD序列起始复合物的形成起始复合物的形成与起始密码子的识别紧密联系在一起，起始阶段的总反应式可写成：30S+50S+mRNA+fMet-tRNAfMet+IF1+IF2+IF3+GTP→[70S·mRNA·fMet-tRNAfMet]+GDP+Pi+IF1+IF2+IF3在形成的三元复合物中，起始密码子正好处于P部位，而fMet-tRNAfMet通过密码子与反密码子的互补作用定位于P部位，A部位是空着的，mRNA像一根细线一样，通过小亚基上弯曲的通道，将作为模板进行翻译。0102无活性的70S核糖体SD序列30S起始复合物70S起始复合物GDP+Pi多肽链合成的延伸每添加一个氨基酸需要三步反应——进位、转肽和移位三步反应循环多次，循环的次数取决于mRNA上的密码子的数目原核生物和真核生物在延伸循环上非常相似快：15-20个氨基酸/秒精确：每参入~10000氨基酸出现1个错误进位转肽移位重复多肽链合成的延伸进位进位是指正确的氨酰-tRNA进入A部位，它是在EF-Tu·GTP的帮助下完成的。进位的具体过程是：首先EF-Tu·GTP和fMet-tRNAfMet以外的氨酰-tRNA形成三元复合物，随后三元复合物进入A部位；氨酰-tRNA的结合导致小亚基的构象发生变化，致使16SrRNA上一段高度保守的碱基与密码子/反密码子复合物前两个碱基对上的小沟能够紧密地发生作用，有利于确保正确的tRNA的结合。如果上述相互作用没有能够稳定特定的核糖体构象，进入A部位的错误氨酰-tRNA在肽键形成之前被释放。核糖体上的一个结构域充