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第1页,共28页,星期日,2025年,2月5日第一节mRNA前体加工的分子基础一、核不均一mRNA(hnRNA)真核基因是单顺反子!平均每个基因8个内含子;占比例高,有的基因内含子达99%。第2页,共28页,星期日,2025年,2月5日5‘-UTR3‘-UTR第3页,共28页,星期日,2025年,2月5日RNA剪接的4种方式:类型I自我剪接、类型II自我剪接、hnmRNA的剪接和核tRNA的自我剪接。第4页,共28页,星期日,2025年,2月5日剪接体内含子主要内含子剪接位点特征边界序列:5-GU---AG-3内含子还有分支保守序列。分支位点?酵母:UACUAAC高等真核:YNCURAY(A代表分支形成点,N任意碱基、R嘌呤、Y嘧啶)第5页,共28页,星期日,2025年,2月5日次要内含子剪接特征:边界序列:5-AU----AC-3上述内含子需要剪接蛋白和snRNA参与剪接2.自我剪接内含子:细菌、真核生物细胞器、低等真核生物细胞核;I型内含子:边界序列5-U---G-3。II型内含子:边界序列5-GU----AG-3III型内含子:第6页,共28页,星期日,2025年,2月5日二、催化活性的小核RNA(snRNA)是真核生物转录后加工过程中RNA剪接体(spliceosome)的主要成分,参与mRNA前体的加工过程。其长度在哺乳动物中约为100-215个核苷酸,主要有6种,常与核蛋白结合,形成snRNP(小核核糖体蛋白颗粒)第7页,共28页,星期日,2025年,2月5日三、剪接蛋白酵母中有30多种剪接蛋白1.SR蛋白含Ser和Arg二肽重复序列,在hnRNA剪接中起重要作用。广泛存在于动物、部分植物;分子量10-50KD.2.与多聚嘧啶串结合的蛋白现发现的有4种,2种U2辅助因子,多嘧啶串结合蛋白,串联剪接因子。第8页,共28页,星期日,2025年,2月5日3.snRNP联结蛋白:小核核糖核蛋白颗粒(smallnuclearribonucleoproteinparticles)4.其他蛋白RNA解旋酶类剪接因子KH结合域剪接因子第9页,共28页,星期日,2025年,2月5日四、剪接体Spliceosome,进行RNA剪接时形成的多组分复合物,其大小为50-60S,主要是由hnRNA、snRNA和蛋白质组成。snRNA主要有U1\U2\U3\U4\U5等剪接体的组装是非常复杂的过程。第10页,共28页,星期日,2025年,2月5日第11页,共28页,星期日,2025年,2月5日第二节内含子的剪接snRNP蛋白结合到pro-mRNA前体剪接位点,促进U2snRNP结合到分支序列,SR蛋白发挥跨内含子识别功能。真核基因内含子长度差异很大,剪接装置需要在巨大的内含子RNA中识别小小的外显子。第12页,共28页,星期日,2025年,2月5日一、剪接体参与的内含子共有序列的识别和剪接复合体的组装U1snRNP首先识别内含子的5端剪接位点,U2snRNP识别分支位点,确定要被删除的内含子。随后,U5snRNP取代U1snRNP,U6snRNP取代U2snRNP。形成活性60s剪接体。发生转脂反应,切去RNA前体的内含子,连接相邻外显子。第13页,共28页,星期日,2025年,2月5日剪接过程第14页,共28页,星期日,2025年,2月5日第15页,共28页,星期日,2025年,2月5日第16页,共28页,星期日,2025年,2月5日二、自我剪接机制I型内含子剪接机制I型内含子具有自我剪接的功能。在剪接反应中,要有鸟嘌呤核苷的辅助。有9个由碱基配对形成的特定二级结构。2.II型内含子主要存在于线粒体中的一类自我剪接内含子,遵从GT--AG规律。6个结构域可形成发夹环。不需要鸟苷的辅助。第17页,共28页,星期日,2025年,2月5日I型内含子第18页,共28页,星期日,2025年,2月5日I型内含子第19页,共28页,星期日,2025年,2月5日第3节变位剪接和反式剪接常规剪接形式:剪接体参与的主要剪接方式内含子自我剪接非常规剪接形式:变位剪接(选择性剪接)反式剪接第20页,共28页,星期日,2025年,2月5日
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