动物细胞培养和核移植技术.pptVIP

动物细胞工程的技术手段动物细胞工程技术的基础动物细胞培养常用技术手段动物细胞工程动物细胞培养动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞核移植新闻播报：2010年10月22日，Selina在上海拍摄新版电视剧《我和春天有个约会》时意外受伤，其背部和四肢被诊断为54%三度灼伤。Selina出院，短发亮相的她增胖5公斤已做3次植皮手术。动物细胞培养和核移植技术过程：如何进行细胞培养?细胞增殖（有丝分裂）（二）原理：(一)概念：动物细胞培养从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。请同学们结合图2-16，阅读课本后，简述动物细胞培养的基本过程？胚胎或幼龄动物器官、组织定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。胰蛋白酶处理取出组织剪碎单个细胞细胞悬液转入培养瓶内培养原代培养细胞贴壁、接触抑制原代培养的特点：使细胞与培养液充分接触细胞分化程度低，分裂能力强。细胞贴壁过程■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。接触抑制②传代培养定义：贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理,然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程）结果：细胞群，细胞产物（动物细胞培养不能最终培养成生物体）010302Q1、为什么传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去？0102Q2、有无50代后继续增殖的可能？一般使用或冷冻保存的正常细胞都是10代以内的（因为细胞内保持了正常的二倍体核型）细胞会随着分裂次数的增多，而逐步衰老、死亡。细胞一般传至10代左右就会衰老死亡细胞传至10－50代，部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展。Q3、人们通常保存哪种类型的细胞？小结：动物细胞培养过程：动物组织块（幼龄动物）细胞悬液胰蛋白酶原代培养单个细胞加培养液原理：细胞增殖（有丝分裂）结果：细胞群，细胞产物剪碎传代培养部分细胞无限传代分瓶培养加胰蛋白酶（动物细胞培养不能最终培养成生物体）多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的知识，认为体培养细胞应该模拟内环境的哪些内容呢？（四）动物细胞培养需要的条件：1、无菌、无毒2、全部的营养物质3、适宜的温度和PH值4、必要的气体条件36.5±0.5度,1)无菌处理；2)添加抗生素；3)更换培养液，清除代谢产物液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。O2、CO2（95％空气+5％CO2）O2是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的PH。01大规模的生产有重要价值的生物制品02如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体03为基因工程技术提供受体细胞04培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植05有毒物质的检测06细胞的生理、药理、病理研究07如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据（五）动物细胞培养技术的应用植物组织培养获得细胞细胞的全能性细胞或细胞产品新的个体或细胞产品培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的营养物质、动物血清营养物质、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较二.动物细胞核移植技术和克隆动物将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。分类胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易；细胞分化程度高，恢复全能性不容易1.动物细胞核移植概念：2.体细胞核移植的过程：（难度高）原理：动物细胞核的全能性◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？◆用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（MⅡ中期）为什么？◆激活方法：◆激活目的：◆促融方法：电刺激◆胚胎移植至代孕受体内妊娠、分娩供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）1.体积大，易操作,营养物质丰富。2.含有促使细胞核表达全能性的物质。有人说它三个母亲，对吗？10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞