分解纤维素的微生物的分离.pptVIP

课题3分解纤维素的微生物的分离一、基础知识1.纤维素纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。土壤中某些微生物能够产生纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用。一、基础知识01纤维素03葡萄糖苷酶02C1酶、Cx酶纤维素酶纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维二糖葡萄糖底物：酶所作用和催化的化合物。1U表示1个酶活力单位，是指在温度为25℃，其他反应条件，如pH等，均为最适的情况下，在1min内转化1mmol的底物所需的酶量。在2支20mL的试管中，分别放入1×6cm的滤纸条，再分别加入pH为4.8、物质的量浓度为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液10mL、11mL。在加入10mL缓冲液的试管中加入1mL纤维素酶（70~80U/mL）。将二支试管固定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h，观察结果。〖思考1〗实验分析：P27的小实验是如何构成对照的？在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；滤纸崩溃法（2）纤维素分解菌的筛选1、筛选纤维素分解菌的方法______________。该方法可以通过________反应直接筛选。刚果红染色法颜色2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成____________，当纤维素被_________分解后，红色复合物无法形成，出现以_____________为中心的________，可以通过___________________________来筛选纤维素分解菌。红色复合物纤维素酶纤维素分解菌透明圈是否产生透明圈可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌练一练：1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是添加标题纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种添加标题纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖添加标题纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁添加标题葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是刚果红能与纤维素形成红色复合物刚果红能与纤维二糖形成红色复合物刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物若培养基上产生了透明圈，则说明已筛

选出了纤维素分解菌(三)、实验设计添加标题土壤取样添加标题将样品涂布到鉴别培养基添加标题选择培养添加标题梯度稀释挑选菌落【资料二】选择培养阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题：纤维素分解菌选择培养基属于______（固体、液体）培养基，原因是__________01____________________________________________________________________________以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖；2、该培养基对微生物_____（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是02液体没有添加琼脂具有你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？葡萄糖纤维素粉若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将__________改为_________。添加标题【资料三】刚果红染色法添加标题方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应添加标题方法二：在倒平板时就加入刚果红鉴别纤维素分解菌的培养基(水溶性羧甲基纤维素钠)思考：这两种方法各有哪些优点与不足颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂操作简便，不存在菌落混杂问题产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。挑选产生透明圈的菌落挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－370C培养，可获得纯培养。四、结果分析与评价1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。