TCVMA-鸡球虫卵囊的收集及孢子化技术.pdf

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团体标准

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鸡球虫卵囊的收集及孢子化技术

Propagationandsporulationtechniqueforcoccidialoocystsinchickens

征求意见稿

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

本文件由中国兽医协会兽医寄生虫病防治分会提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

1

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鸡球虫卵囊的收集及孢子化技术

1范围

本文件规范了鸡球虫卵囊的扩繁，收集及其孢子化方法。

本文件适用于鸡球虫病相关科研工作、流行病学调查、疾病诊断和疫苗生产等。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

本文件没有规范性引用文件。

3术语与定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4符号与缩略词

无

5仪器设备和主要试剂

5.1仪器材料

80目和180目网筛、玻璃棒、15mL离心管、1mL注射器（无针头）、250mL离心瓶、烧杯、手术

剪刀、镊子、微量移液器（1mL和20μL）、麦氏计数器、血细胞计数板、水平离心机、28℃恒温培养

箱。

5.2主要试剂

去离子水、饱和食盐水、2.5%重铬酸钾溶液，配制方法见附录A。

6操作步骤

6.1卵囊的计数

将保存于4℃2.5%重铬酸钾溶液中的鸡球虫孢子化卵囊取出，混合均匀。将一小部分卵囊用饱和

食盐水稀释100倍后混合均匀，用1mL移液器吸取稀释液并填满麦氏计数器左右两个计数室，静置2min，

在显微镜10倍镜下计数孢子化卵囊。一般计数对角线10个小格里中的卵囊，最终确定1mL重铬酸钾溶

液中的孢子化卵囊数。具体计数方法按附录B说明进行。

6.2卵囊的洗涤

2

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根据1mL重铬酸钾溶液中的孢子化卵囊数及扩繁卵囊数确定重铬酸钾溶液体积，将重铬酸钾溶液

转移至15mL离心管中，4000r/min离心8min，弃上清，加入去离子水重悬沉淀清洗并离心，反复用去

4-1

离子水清洗直到上清澄清，最后用去离子水重悬卵囊沉淀并将卵囊密度调至1✕10个∙mL。感染剂量见

附录C。

6.3鸡球虫的感染

将1日龄健康雏鸡饲养在经严格消毒的无球虫动物房内，喂养至15~25日龄，在感染前半天禁止喂水

喂料，饮水和饲料均不添加任何抗球虫药物。用1mL注射器（无针头）吸取6.2中卵囊悬液1mL，经口

灌服至嗉囊。

6.4粪便的收集

鸡感染球虫后，排卵囊期长短与不同虫种和鸡的免疫力有关，卵囊产量不仅与