动物细胞大规模培养方法及其应用.pptVIP

Section4：Scaling-upofcellculture动物细胞的大规模培养动物细胞大规模培养技术失建立在贴壁培养法和悬浮培养法基础上，再融合了固定化细胞、填充床、生物反应器技术以及人工灌流等技术而发展起来的。主要包括：悬浮培养微载体培养微囊化培养中空纤维法利用大规模培养哺乳类细胞是一项重要的生产生物制品的技术，包括疫苗、干扰素、激素、生长因子和单抗等，具有很高的经济和社会效益。但是悬浮培养的细胞密度较低，转化细胞悬浮培养有潜在致癌危险，培养病毒易失去病毒标记而降低免疫强力。此外，有许多动物细胞属于贴壁依赖性的，不能悬浮培养。动物细胞的悬浮培养是在微生物发酵的基础上发展起来的。动物细胞没有细胞壁保护，不能耐受剧烈的搅拌和通气。悬浮培养，设备结构简单，有成熟的理论计算，可以借鉴微生物发酵的部分经验，放大效应小。对于小规程培养多采用转瓶和滚瓶培养，大规模培养多采用发酵罐式的细胞培养反应器。悬浮培养的关键是要选择适当的搅拌和通气装置.1、悬浮培养微载体培养系统贴壁依赖性动物细胞的培养，最初是采用滚瓶系统，其结构简单、投资少，技术成熟，重现性好，放大只是简单地增加该瓶数。但是，滚瓶系统劳动强度大，单位体积提供细胞生长的表面积小。为了克服这些不利因素，1967年，vanwezell开发了微载体系统培养贴壁依赖性细胞。微载体是直径为60~250μm的微珠。采用微裁体系统培养动物细胞，细胞贻壁于微载体上，微载体(和细胞)悬浮于培养基中，细胞在微载体表面逐渐生长成单层。1967年，VanWezel开发了微载体系统培养贴壁细胞。微载体是直径60-250μm的微珠。多用带不同基团的葡聚糖交联成几种大分子，使其带有适当电荷或介质，以利于细胞的贴壁及生长。这种模式，把单层培养和悬浮培养的优点融汇在一起，具有两种培养方法的优点。1)表面积／体积比大2)由于微裁体悬浮于培养基中，是均匀悬浮培养，简化了细胞生长各种环境因素的监测和控制。3)培养基利用率高。4)采样重演性好。5）收获过程不复杂。6)放大较容易。7)劳动强度小，占用空间小与微载体结合的生物反应器系统收获细胞接种——球传球包埋培养悬浮生长和对贴壁依赖生长的细胞都适用，细胞生长的密度高，抗剪切力和抗污染能力强。对悬浮生长的细胞用海藻酸钙包埋，对贴壁依赖生长细胞用胶原包埋。由于动物细胞培养慢而费有高，且对剪切力敏感，经包埋后可有效的保护细胞。在动物细胞微囊化的制备中，主要是应用海藻酸—聚氨基酸的方法，简单过程是动物细胞与海藻酸溶液混合搅拌，经过微囊发生器将微球滴入氯化钙溶液中，形成凝胶，然后再用聚氨基酸处理，使微球表面成膜，最后用柠檬酸处理去除微球内的钙离子，以便球内的海藻酸成液态，动物细胞得以悬浮在其中。动物细胞的微囊化中海藻酸和聚氨基酸是关键材料。01微囊化方法能使细胞处于相对稳定、受剪切力小的环境中，而养分和氧又可以从微囊外的培养液扩散进入。024、微囊化培养5、中空纤维培养系统中空纤维是聚砜或丙烯的聚合物制成，一个培养筒内由数千根中空纤维所组成，然后封存在特制的圆筒中，组成的培养系统。每根纤维管内成为“内室”，可灌流无血清培养液供细胞生长；管与管之间称为“外室”。接种的细胞就贴在管壁上，并吸取“内室”渗透出来的养分，迅速生长繁殖。中空纤维培养系统自学：1000L气升式细胞反应器系统中空纤维反应器：左右两箭头为无菌空气进出口。细胞生长在由半透性的多孔膜制成的中空纤维中外表面。典型动物细胞培养反应器

中空纤维反应器（贴壁反应器）B、气腔式反应器（悬浮培养或微载体培养用:搅拌器形式之一）其中关键的是一个笼式撑拌器。笼式通气装置的特点主要是可以避免在向培养基中通气时，气泡不会直接损伤细胞。（因为气泡已被上部的200目丝网机械的破坏了。同时，在采用微教体系统培养时，微载体不会被由于通气所产生泡沫所裹抉在气液界面。导流筒随搅拌同步转动（30~60rpm)时，由于离心力的作用，使搅拌器中心管内产生负压，迫使搅拌器外培养基流入中心管，沿管螺旋上升，再从三导流筒口排出，绕搅拌器外缘螺旋下降，培养基和悬浮的细胞或附着细胞或微载体反复循环。由流体搅拌加流体循环，使反应器内流体混和相当好。C膜搅拌器(悬浮培养或微载体培养用:搅拌器型式之二)无泡搅拌反应器是一种装有膜搅拌器的生物反应器，这种反应器的开发和应用在生产中同时解决了通气和均相化的要求。无泡搅拌反应器采用多孔的疏水性的塑料管装配成通气搅拌桨。由于选用多孔塑料管具有良好的氧通透性，从而实现无泡通气搅拌。由于这类反应器能提供动物细胞生长中所需的溶氧要求，产生