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基本原理一、Lamber-Beer定律二、吸光係數和吸收光譜三、偏離Beer定律的因素四、透光率的測量誤差一、Lamber-Beer定律：吸收光譜法基本定律描述物質對單色光吸收強弱與液層厚度和待測物濃度的關係假設一束平行單色光通過一個吸光物體續前取物體中一極薄層續前討論：1．Lamber-Beer定律的適用條件（前提）入射光為單色光溶液是稀溶液2．該定律適用於固體、液體和氣體樣品3．在同一波長下，各組分吸光度具有加和性應用：多組分測定二、吸光係數和吸收光譜1．吸光係數的物理意義：單位濃度、單位厚度的吸光度討論：1）E=f（組分性質，溫度，溶劑，λ）當組分性質、溫度和溶劑一定，E=f（λ）2）不同物質在同一波長下E可能不同（選擇性吸收）同一物質在不同波長下E一定不同3）E↑，物質對光吸收能力↑,定量測定靈敏度↑→定性、定量依據續前2．吸光係數兩種表示法：1）摩爾吸光係數ε：在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm時的吸光度2）百分含量吸光係數/比吸光係數：在一定λ下，C=1g/100ml，L=1cm時的吸光度3）兩者關係3．吸收光譜（吸收曲線）：λ~A最大吸收最小吸收特徵值→定性依據肩峰末端吸收續前4．吸光度測量的條件選擇：1）測量波長的選擇：2）吸光度讀數範圍的選擇：3）參比溶液(空白溶液)的選擇：選A=0.2~0.7注：採用空白對比消除因溶劑和容器的吸收、光的散射和介面反射等因素對透光率的干擾三、偏離Beer定律的因素依據Beer定律，A與C關係應為經過原點的直線偏離Beer定律的主要因素表現為以下兩個方面（一）光學因素（二）化學因素（一）光學因素1．非單色光的影響：Beer定律應用的重要前提——入射光為單色光照射物質的光經單色器分光後並非真正單色光其波長寬度由入射狹縫的寬度和棱鏡或光柵的解析度決定為了保證透過光對檢測器的響應，必須保證一定的狹縫寬度這就使分離出來的光具一定的譜帶寬度續前續前討論：入射光的譜帶寬度嚴重影響吸光係數和吸收光譜形狀結論：選擇較純單色光（Δλ↓，單色性↑）選λmax作為測定波長（ΔE↓，S↑且成線性）續前2．雜散光的影響：雜散光是指從單色器分出的光不在入射光譜帶寬度範圍內，與所選波長相距較遠雜散光來源：儀器本身缺陷；光學元件污染造成雜散光可使吸收光譜變形，吸光度變值3．反射光和散色光的影響：反射光和散色光均是入射光譜帶寬度內的光直接對T產生影響散射和反射使T↓，A↑，吸收光譜變形注：一般可用空白對比校正消除4．非平行光的影響：使光程↑，A↑，吸收光譜變形（二）化學因素Beer定律適用的另一個前提：稀溶液濃度過高會使C與A關係偏離定律四、透光率的測量誤差——ΔT影響測定結果的相對誤差兩個因素：T和ΔTΔT影響因素：儀器噪音1）暗噪音2）訊號噪音續前1）暗噪音——與檢測器和放大電路不確切性有關與光訊號無關續前2）訊號噪音——與光訊號有關表明測量誤差較小的範圍一直可延至較高吸光度區，對測定有利第四節紫外分光光度計1．光源：2．單色器：包括狹縫、准直鏡、色散元件棱鏡——對不同波長的光折射率不同色散元件分出光波長不等距光柵——衍射和干涉分出光波長等距鎢燈或鹵鎢燈——可見光源350~1000nm氫燈或氘燈——紫外光源200~360nm續前3．吸收池：玻璃——能吸收UV光，僅適用於可見光區石英——不能吸收紫外光，適用於紫外和可見光區要求：匹配性（對光的吸收和反射應一致）4．檢測器：將光信號轉變為電信號的裝置5．記錄裝置：訊號處理和顯示系統光電池光電管光電倍增管二極體陣列檢測器類型：1．單光束分光光度計：特點：使用時來回拉動吸收池→移動誤差對光源要求高比色池配對