实验六高效液相色谱法.pptVIP

20.3.2.液相色谱流动相20.4.吸附色谱(AdsorptionChromatography)20.4.1.液固吸附色谱固定相吸附色谱所用固定相多是一些吸附活性强弱不等的吸附剂，如硅胶、氧化铝、聚酸胶等。由于硅胶的优点较多，如线性容量较高，机械性能好，不溶胀，与大多数试样不发生化学反应等，因此，以硅胶用得最多。在高效液相色谱法中，表面多孔型和全多孔型都可作吸附色谱中的固定相，它们具有填料均匀、粒度小。孔穴浅的优点，能极大地提高柱效。但表面多孔型由于试样容量较小，目前最广泛使用的还是全多孔型微粒填料。20.4.2．吸附色谱分离机理当流动相通过固定相（吸附剂）时，吸附剂表面的活性中心就要吸附流动相分子。同时，当试样分子（X）被流动相带入柱内，只要它们在固定相有一定程度的保留就要取代数目相当的已被吸附的流动相溶剂分子。于是，在固定相表面发生竞争吸附:20.5.分配色谱(PartitionChromatography)研究最多、应用最广泛的高效液相色谱类型。可分为液-液色谱和化学键合相色谱。前者是早期主要分配色谱类型，以物理吸附涂渍固定液在多孔载体表面上为固定相；后者以键合相为固定相，即化学键合固定相至载体或基质表面。化学键合相色谱巳成为占绝对优势的分配色谱类型。在液-液色谱中，流动相和固定相都是液体，能适用于各种样品类型的分离和分析（极性的和非极性的、水溶性和油溶性的、离子型的和非离子型的化合物）。液一液分配色谱法（LLPC）液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。（1）分离原理************高效液相色谱法

(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)20.1.1高效液相色谱法的产生和发展高压、高速的现代高效液相色谱仪于1967年面世，导致高效液相色谱法(high-performanceliquidchromatography，HPLC)的产生。薄壳型填料，柱效仅每米1000~3000塔板数5~10μm球型和无定型微粒硅胶，每米5~6万理论塔板数高度均匀甚至单分散1~3μm硅胶基质球形填料，达15~30万理论塔板/m。新型分离模式和方法不断增加1.2.高效液相色谱法的特点及与其他色谱法比较1基本特点高效、高速、高灵敏度、高选择性填料粒径和流动相性质影响色谱柱效局限性3适用范围广单击此处添加文本具体内容，简明扼要的阐述您的观点。根据需要可酌情增减文字，以便观者准确的理解您传达的思想。2操作条件流动相对分离选择性的影响柱外效应操作压力1.吸附色谱(adsorptionChromatography)2.分配色谱(partitionChromatography)3.离子交换色谱(ion-ExchangeChromatography)4.体积排阻色谱(sizeExclusionChromatography)需要指出的是每种色谱方法通常存在一种起支配作用的主要保留机理，但可能还存在次要的其他机理。20.1.3.高效液相色谱法分类和正反相色谱体系根据固定相和液体流动相相对极性的差别，有正相色谱和反相色谱两种色谱体系或方法。反相色谱和正相色谱主要区别是流动相和固定相的相对极性，最初形成于液液分配色谱，现已广泛应用于其他各种色谱方法。20.1.3.高效液相色谱法分类和正反相色谱体系上述每种色谱类型均可进一步分为多个不同色谱方法。这些方法可用于分析分离，也可用于制备分离，各色谱方法在相关领域应用互相补充。20.2.高效液相色谱仪HPLC示意图现代高效液相色谱使用3~10μm柱填料，为达到适用的流动相流速，高压泵需提供几十MPa或数百大气压力的柱前压。因而HPLC仪器比其他类型的色谱仪要复杂和昂贵。20.2.高效液相色谱仪20.2.1.流动相贮器和溶剂处理系统现代高效液相色谱仪配备一或多个流动相储液器，一般为玻璃瓶。每个储瓶容积500~2000mL。储液瓶位置要高于泵体，以保持一定的输液静压差，在泵启动时易于让残留在溶剂和泵体中微量气体通过放空阀排出。储器常装有脱除溶剂中溶解的氧、氮等气体装置，这些溶解气可能形成气泡引起谱带展宽，并干扰检测器正常工作。溶剂脱气主要有两种方法，其一是搅拌下真空或超声波