分子变异和生态学问题.pptVIP

2.4DNA指纹分析两种不同级别的DNA指纹分析，多位点和单位点指纹。单位点指纹通过与一克隆的小卫星探针的Southern杂交，可以检测在一个单位点上等位DNA限制性片段的不同大小。一个典型的小卫星DNA序列的长度大于20,000个碱基对,它包括一个短的10-60碱基对的非编码序列的重复拷贝。重复的次数有显著的差异，可以产生易于检测的不同长度的限制性片段，从而在一些小卫星位点得到了很高水平的多态性(杂合率达100%)。小卫星位点是“可变数量的串联重复(VNTR)”位点的例子。多位点DNA指纹，用到一个“多核心(poly-core)”探针，它可与部分重复单位(即核心)自动杂交，这种重复单位在微卫星的很多分离的位点上是很普通的。可以用不同的核心探针来检测非依赖性小卫星带谱。多位点指纹法的一个主要优点是核心探针可用在广泛的生物体中。多位点指纹法的一个缺点是指纹谱复杂，难以比较，特别是在不同的凝胶上得到的谱。组成的DNA片段也不能归因于特异性位点。单位点指纹法通过允许基因型归因于常常是高度变异的位点,避免了这些问题。但它也有缺点，就是在所研究的每一个物种中或至少在一个近缘种中都得找出一种标记系统。另外一种级别的VNTR位点包括了简单的序列，或微卫星多态性(Tautz,1989)。微卫星(microsatellite)包含不同数量简单而短的串联重复，如(GT)n或(CAC)n。小卫星和微卫星的区别是随意的，但实际的区别是微卫星总的长度小到允许应用PCR技术分析。所以微卫星的变异分析比小卫星容易得多(见Rassmann等1991,Schiotterer等(1991)的方法)。特异位点微卫星系统常在宽范围的近缘种中适用(Schltterer等,1991),在一定程度上比小卫星探针更有用。由于这里数据太少而不能在两个级别的两个位点进行典型变异的细致比较。高水平的多态性很可能在小卫星位点上得到，但微卫星的变异似乎适合作大量的应用。PCR可以产生足量的特定长度的DNA,适合各种方法的进一步分析，如RFLP、测序和与特异探针的杂交。在聚合酶链式反应中，应用一耐高温的DNA聚合酶循环复制相反的两条DNA链上两个引物部位之间的序列,这个反应需要两个合成的寡核苷酸引物的存在与DNA上的这些部位互补，每循环一次,产量成倍增加。这个过程的灵敏度使得它可以对极少量DNA进行分析,例如这些DNA可来自单个精子细胞，单根头发，单个羽毛，古代的骨胳或博物馆中的标本。由于所研究的序列只需要很少的完整拷贝,甚至固定的或包埋了的组织都适合来提取DNA作PCR(Greer等1991)，所以，很简单的野外样品保存和实验室提取的操作程序都会令人满意。01022.4PCR因为扩增的PCR产品有足够的量可供直接在电泳凝胶片上检测,所以PCR为杂交方法提供了另一个很好的选择。例如可以检测引物部位间的序列长度变异或检测在一个引物部位本身的变异。PCR产物可以用作点印迹DNA-DNA杂交时的靶材料,也可用作限制性分析，和其它技术结合，可以不进行广泛地测序，就可以相对方便地收集有用的基于序列的标记数据。分子变异与生态学问题1、分子变异分子变异来源于基因突变。DNA序列在染色体复制过程中，正常情况下被精确地拷贝。然而也会因种种原因偶然出现错误，从而产生新的序列，这些错误称为突变(mutations)。基因突变既可以发生在体细胞内，也可以发生在生殖细胞内。体细胞内的突变一般不影响后代性状；而生殖细胞内的突变可影响后代性状。进化中所谈的基因突变均是指生殖细胞的突变，或是种系细胞的突变。基因突变的结果导致基因的一种等位形式变成另一种等位形式。遗传学研究中，将自然界中普遍出现的性状，称为野生型。决定这种性状的等位基因称为野生型等位基因。野生型等位基因发生突变即成为突变型等位基因。从野生型变为突变型，称为正向突变；反之，从突变型也可以变回野生型，称为回复突变或逆向突变。1.1基因突变种类基因突变根据受突变事件影响的DNA序列的长度分为点突变(pointmutation)和序列片段突变(fragmentmutation)。点突变影响一个核苷酸；序列片段突变影响两个以上相邻核苷酸。根据突变事件造成的变化类型分为：①替换(substitutions)，即一个核苷酸被另一个所取代；②缺失(deletion)，即从DNA中移去一个或多个核苷酸；③插入(insertions)，向序列中添加一个或多个核苷酸；④倒位(inversion)，即含有2个或多个碱基对的双链DNA片段断裂后，转动180°再重连接在一起。图中(a)表示基因原序列；(b)表示基因序列中从C到T的转换