细胞化学染色基本方法及临床应用.pptx

细胞化学染色检验

一、概述

二、细胞化学染色的基本方法

三、临床应用

一、概述

1、概念：

细胞化学染色是细胞学和化学相结合而成的一门科学，以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质(包括酶类、脂类、蛋白质、糖类、铁、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。

2.细胞化学染色的目的

(1)辅助判断急性白血病的类型

(2)辅助血液系统等疾病的诊断与鉴别诊断

3.细胞化学染色的基本步骤：包括固定、显色反应、

复染。

(1)固定：为了保持细胞结构及化学成分的稳定性而选用的方法。根据染色的目的，最常用的固定剂有甲醛、甲醇、乙醇等。

(2)显色：通过不同的化学反应，最终形成稳定的

有色沉淀，使被监测的化学物质显示出来。包括

偶氮偶联法：如NAP、ACP及各种脂酶染色

普鲁氏蓝反应：如铁染色

雪夫(shiff)反应：如PAS染色

联苯胺法：如POX染色

(3)复染：使各种目的细胞能显示出来更便于观察

二、细胞化学染色的基本方法

十过氧化物酶染色

十中性粒细胞碱性磷酸酶染色

十糖原染色

+非特异性酯酶染色

+特异性酯酶染色

十骨髓铁染色

(一)过氧化物酶(POX)染色

1、原理：

pOx

H₂O₂〔o〕

联苯胺→联苯胺蓝

十蓝黑色颗粒

亚硝基铁氰化钠

—→

2.试剂

(1)联苯胺酒精溶液：

取0.3g联苯胺加亚硝基铁氰化钠饱合液(36%)1ml,

再加95%乙醇至100ml,存在于棕色瓶中，可存一年。

(2)稀过氧化氢(新鲜配制):取50ml蒸馏水加30%H₂O₂1滴。

(3)瑞吉氏复染液

3、染色方法

1、新鲜干燥涂片加联苯胺酒精溶液10滴，覆盖整个髓膜，固定1-2min。

2、再加等量的稀H₂O₂,混匀后染色4-5min,勿倒去染液直接流水冲洗。

3、瑞氏染液复染。

4、注意事项

(1)H₂O₂要新鲜配制，注意有效性

(2)标本要新鲜，最长不超过一周，时间长了酶活

性减弱。

(3)POX染色后，一定要冲洗干净，否则染料堆积

或浮于表面，影响瑞氏染色结果观察。

5、结果判定：中性粒细胞杆状及分叶核呈强阳

性是染色成功的标志(设对照片)。

在细胞的胞浆中出现蓝绿色或蓝棕色颗粒为阳

性反应。

1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈

阴性；3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性

1

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3

急性粒细胞白血病(M₂a)的POX染色原始粒细胞均呈阳性

检验星空

急性淋巴细胞白血病的POX染色

1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；其他原始淋巴细胞

急性早幼粒细胞白血病的POX染色

1.原始红细胞，呈阴性；其他早幼粒细胞均呈强阳

急性单核细胞白血病的POX染色

1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳性：

3.原始单核细胞，呈弱阳性；其他原幼单核细胞呈阴

6、临床意义

(1)正常分布

粒系：早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈不同程度阳性。

单核系：早期原单阴性，其它阶段皆呈弱阳性。淋巴、红系、浆细胞、巨核均呈阴性。

(2)急性白血病的鉴别诊断

幼稚细胞POX阳性率≥3%:急非淋(AML)

幼稚细胞POX阳性率3%:急淋(ALL)

(二)中性粒细胞碱性磷酸酶染色(偶氮偶联法)

1.原理

磷酸奈酚钠NAP～磷酸+萘酚

9.8偶联

萘酚+重氮盐—→不溶性有色沉淀物定位于胞浆(坚固蓝RR盐)

PH9.2

2.试剂

(1)固定剂：10%甲醛甲醇溶液

(2)Tris-Hcl缓冲液的配制：Tris粉〔三胺基甲烷〕4.85克溶于200ml蒸馏水中，加浓HCL1-2滴，PH调至9.2,4℃保存!

(3)作用(基质液):磷酸萘酚钠5mg

N-N二甲基酰胺1ml

Tris-Hcl液4ml

坚固蓝RR盐5mg

(4)复染液：1%中性红

3.操作步骤

1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片(标本片及对照片)加固定剂作用30秒(染缸),水洗待干；

2、滴加作用液，室温染色15min,水洗待干；

3、1%中性红复染1min

4.注意事项

(1)重氮盐以坚固蓝RR盐为最佳；

(2)坚固蓝RR盐应适量：过多易造成染色失败，过少使反应减弱；

(3)每次都要做阳性对照；

(4)作用液新鲜配制，配好后要立即使用

5.结果观察：(对照片成熟中性粒细胞中出现棕

黑色颗粒为阳性细胞，说明染色成功)

正常人除