临床酶学检验技术.pptx

临床酶学检验技术;;;酶得概念:

人卫第六版

酶(enzyme)就是由活细胞合成得、对其特异底物起高效催化作用得蛋白质,就是机体内催化各种代谢反应最主要得生物催化剂(biocatalyst)。

人卫第七版

生物体内得酶(enzyme)就是对其特异底物起高效催化作用得蛋白质和核糖核酸,前者就是就是机体内催化各种代谢反应最主要得催化剂。;酶促反应表示为:

底物:Subestrate:S

产物:Product:P

酶:Enzyme:E;酶得化学本质:

绝大多数得酶就是蛋白质,称这类酶为enzyme具有催化功能得RNA被称为核酶(ribozyme)

具有催化功能得DNA被称为脱氧核酶(deoxyribozyme);酶得研究历史:

1926年J、B、Sumner首次从刀豆制备出脲酶结晶,证明其为蛋白质,并提出酶得本质就就是蛋白质得观点

1982年T、Cech发现了第1个有催化活性得天然RNA——ribozyme(核酶),以后Altman和Pace等又陆续发现了真正得RNA催化剂

1995年,JackW、Szostak研究室首先报道了具有DNA连接酶活性得DNA片段,称之为脱氧核酶(deoxyribozyme);临床酶学

高诊断灵敏度

高诊断特异性

临床酶学检验技术

酶活性测定

酶蛋白质量测定;临床酶学得历史:

1908年Wohlgemuth用尿淀粉酶(AMY)诊断急性胰腺炎

1930s,LPS、ALP、ACP开始用于临床——定时法

1950s,Karmen、LaDue、Wroblewski等人建立了分光光度法,ALT、AST、CK、LD等酶活性测定应用于肝胆疾病、心脏疾病得诊断——连续监测法

1970s,同工酶和酶蛋白质量测定

1980s,同工酶亚型

;大家有疑问的，可以询问和交流;目录;;;;;(三)

酶

得

结

构;;;;;;;;;;一种酶仅作用于一种或一类化合物,或一定得化学键,催化一定得化学反应并生成一定得产物。酶得这种特性称为酶得特异性或专一性。

;绝对特异性(absolutespecificity):只能作用于特定结构得底物,进行一种专一得反应,生成一种特定结构得产物。

相对特异性(relativespecificity):作用于一类化合物或一种化学键。

立体结构特异性(stereospecificity):作用于立体异构体中得一种。;;;酶促反应在温和条件下进行

加热、过酸、过碱、重金属都可以使酶活性降低(失活)

;●改变pH

●急速加热

●加入变性剂

●加入金属鳌合剂

●加入酶抑制剂抑制剂

●大量稀释;添加物;;表4-1酶在医学检验中得应用举例;临床应用酶;;(一)米氏方程

1913年,德国化学家Michaelis和Menten根据中间产物学说对酶促反映得动力学进行研究,推导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关系得著名公式,称为米氏方程。

;;(二)酶促反应进程

1、延滞期就是指酶促反应开始至达到最大反应速度所需要得时间

2、线性期就是指酶促反应速度保持恒定得时期,不受底物浓度得影响

3、非线性期随着反应时间得延长,底物消耗越来越明显,酶促反应速度明显下降,偏离线性而进入非线性期

酶促反应进程好似100m径赛

;图4-1酶促反应时间进程曲线;(三)动力学参数

1、初速度(initialvelocity)指在反应最初阶段底物得消耗量很小(一般在5﹪以内)时得反应速度,用v0来表示

2、最大反应速度(maximumvelocity)指当酶得结合位点与底物结合饱和时得反应速度,通常用V或Vmax来表示

3、米氏常数(Michaelisconstant,Km)指酶促反应速度为最大反应速度一半时得底物浓度,单位同底物浓度;(四)酶偶联反应

Ex:待测酶

Ea:辅助酶

Ei:指示酶;;酶偶联反应进程

1、预孵育期

2、延滞期

3、线性期

4、非线性期;