吸光光度法学习课件.ppt

常用光源光源波長範圍(nm)適用於氫燈185~375紫外氘燈185~400紫外鎢燈320~2500可見，近紅外鹵鎢燈250~2000紫外，可見，近紅外氙燈180~1000紫外、可見（螢光）能斯特燈1000~3500紅外空心陰極燈特有原子光譜鐳射光源特有各種譜學手段單色器作用:產生單色光常用的單色器：棱鏡和光柵樣品池（比色皿）厚度(光程):0.5,1,2,3,5…cm材質：玻璃比色皿－－可見光區石英比色皿－－可見、紫外光區檢測器作用：接收透射光，並將光信號轉化為電信號常用檢測器：光電管光電倍增管光二極體陣列光電管分為紅敏和紫敏，陰極表面塗銀和氧化銫為紅敏，適用625－1000nm波長；陰極表面塗銻和銫為紫敏，適用200－625nm波長目視比色法—比色管光電比色法—光電比色計光源、濾光片、比色池、硒光電池、檢流計分光光度法與分光光度計722型分光光度計光學系統圖1.光源；2.濾光片；3,8聚光鏡4,7.狹縫；5.准直鏡；6.光柵9.比色池；10.光電管10.4顯色反應及影響因素要求：a.選擇性好b.靈敏度高(ε104)c.產物的化學組成穩定d.化學性質穩定e.反應和產物有明顯的顏色差別(?l60nm)沒有顏色的化合物，需要通過適當的反應定量生成有色化合物再測定－－顯色反應1顯色反應絡合反應氧化還原反應2顯色反應類型離子締合反應成鹽反應褪色反應Zr(IV)-偶氮胂III絡合物測定草酸吸附顯色反應達旦黃測定Mg(II),Mg(OH)2吸附達旦黃呈紅色3顯色劑無機顯色劑:過氧化氫，硫氰酸銨，碘化鉀有機顯色劑：偶氮類：偶氮胂III三苯甲烷類三苯甲烷酸性染料鉻天菁S三苯甲烷鹼性染料結晶紫鄰菲羅啉類：新亞銅靈肟類：丁二肟4多元絡合物混配化合物Nb-5-Br-PADAP-酒石酸V-PAR-H2O離子締合物AuCl4--羅丹明B金屬離子-配體-表面活性劑體系Mo-水楊基螢光酮-CTMAB5影響因素a溶液酸度（pH值及緩衝溶液）影響顯色劑的平衡濃度及顏色，改變Δl影響待測離子的存在狀態，防止沉澱影響絡合物組成形式pHλmax(nm)形式pHλmax(nm)H4L+1.2462-465Sn4+1.0530H3L4.8-5.2462,490Ga3+5.0550H2L-8.4-9.0512HL2-11.4-12.0532-538pH對苯芴酮及其絡合物的顏色影響b顯色劑的用量稍過量，處於平臺區c顯色反應時間針對不同顯色反應確定顯示時間顯色反應快且穩定；顯色反應快但不穩定；顯色反應慢，穩定需時間；顯色反應慢但不穩定d顯色反應溫度加熱可加快反應速度，導致顯色劑或產物分解e溶劑f干擾離子有機溶劑，提高靈敏度、顯色反應速率消除辦法：提高酸度，加入隱蔽劑，改變價態選擇合適參比褪色空白(鉻天菁S測Al，氟化銨褪色，消除鋯、鎳、鈷干擾)選擇適當波長10.5光度分析法的設計1.選擇顯色反應2.選擇顯色劑3.優化顯色反應條件4.選擇檢測波長5.選擇合適的濃度6.選擇參比溶液7.建立標準曲線測量條件選擇1測定波長選擇選擇原則：“吸收最大，干擾最小”靈敏度選擇性2測定濃度控制控制濃度吸光度A：0.2～0.8減少測量誤差3參比溶液選擇儀器調零消除吸收池壁和溶液對入射光的反射扣除干擾試劑空白試樣空白褪色空白4標準曲線製作理論基