奶粉中双氰胺的检测方法HPLCUV和HPLCMSMS法.docVIP

奶粉中双氰胺检测方法（HPLC-UV和HPLC-MS/MS法）

北京时间1月25日凌晨消息,新西兰牛奶中发觉了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。即使国际标准未对食品中双氰胺限量,但高剂量双氰胺对人体是有毒。

本文采取Cleanert?MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil?HILIC液相色谱柱,建立了奶粉中双氰胺MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。

1试验部分

1.1仪器、试剂与材料

高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。

双氰胺标准品（CAS:461-58-5;FW=84.08）,Cleanert?MAS-QuChERS-双氰胺净化管,Venusil?HILIC液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,试验用水为超纯水。

图1双氰胺分子式

1.2试验步骤

提取、净化:称取1g试样于50mL具塞离心管中,加入2mL水溶解后,加乙腈定容至10mL,超声10min,8000r/min离心5min,取2mL上清液加入Cleanert?MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料,涡旋0.5min,8000r/min离心5min,取上清液过0.22μm滤膜,待测。

1.3试验条件

1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）:

色谱柱:Venusil?HILIC（5μm,100?,4.6*250mm）;

流动相:10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）:乙腈=10:90;

波长:220nm;进样量:10μl;柱温:30℃

1.3.2LC-MS/MS法:

（1）色谱条件:

色谱柱:Venusil?HILIC（5μm,100?,2.1*150mm）;

流动相:0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）:乙腈=10:90;进样量:10μL;柱温:30℃

（2）质谱条件:

质谱仪:API4000+;离子源:电喷雾离子源;扫描方法:正离子扫描;检测方法:多反应监测;CAD:8.00;CUR:10.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;TEM:500.00。

表1双氰胺质谱信息

药品名称

监测离子对

DP

EP

CE

CXP

双氰胺

85.1/68.1

71

10

41

6

85.1/43.1

71

10

41

6

注:带“____”监测离子对为定量离子对。

结果与讨论

2.1高效液相色谱法:

2.1.1线性关系和检出限

正确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液;

分别量取一定量标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为0.1μg/mL,0.5μg/mL,1.0μg/mL,2.0μg/mL,5.0μg/mL和10.0μg/mL标准溶液,根据上述色谱条件,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表2:

表2双氰胺线性方程和定量限（HPLC法）

名称

保留时间

线性方程

相关系数

最低定量限（S/N=10）

双氰胺

4.92min

Y=116.44X+3.2699

0.9997

0.1μg/ml

2.1.

选择10.0μg/mL标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积RSD值,结果见表3:

表3检测方法定性和定量稳定性考察考察（HPLC法）

标号

保留时间/min

峰面积

1

4.930

1061.7

2

4.933

1072.2

3

4.930

1064.4

4

4.929

1079.7

5

4.930

1067.3

6

4.934

1073.6

RSD,%

0.04

0.62

图2双氰胺0.5μg/mL标准溶液谱图（HPLC）图3定性定量稳定性考察谱图（HPLC法）

2.1.

选择市售某品牌奶粉试样,进行添加回收试验,结果见表4

表410μg/g添加回收试验结果（HPLC法）

平行1,%

平行2,%

平行3,%

平均值,%

RSD,%

98.6

88.4

89.8

92.3

5.99

图4奶粉空白谱图（HPLC法）图5奶粉10μg/g添加水平谱图（HPLC法）

2.2LC-MS/MS法

2.2.1线性关系和检出限

正确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液。

分别量取一定量标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为5ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和500ng/mL标准溶液