蛋白质分子的折叠和定位.ppt

線粒體的蛋白轉運裝置——TOM和TIM複合體①TOM複合體（外膜轉運酶複合體）負責通過外膜，進入膜間隙，②TIM複合體（內膜轉運酶複合體）負責將蛋白質轉運到基質，也可將某些蛋白質安插在內膜進入基質的蛋白質可以先通過TOM複合體進入膜間隙，然後通過TIM複合體進入基質。也可以通過線粒體內、外膜間的接觸點（鼠肝直徑1um線粒體上約115個接觸點），一步進入基質，在接觸點上TOM與TIM協同作用完成蛋白質向基質的輸入.線粒體內外膜的接觸點蛋白質分子進入線粒體基質的模型：1、前體蛋白在核糖體合成，進入胞液2、分子伴侶蛋白結合前體蛋白3、信號序列與TOM識別，被轉運跨過外膜4、前體蛋白在膜間質與TIM接觸，被轉運進入線粒體基質5、基質靶向序列被水解，蛋白折疊形成天然構象線粒體膜間質蛋白轉運：轉運開始與基質蛋白相同，當抵達TIM後：A.前體蛋白先進入線粒體基質，基質導入序列被切除，膜間質導入序列使蛋白通過內膜上的複合體被送回到膜間質，膜間質導入序列被切除後，蛋白折疊成天然構象。B.只有前體蛋白的基質導入序列進入基質被切除，膜間質導入序列進入內膜也被切除，未進入內膜的膜間質蛋白釋放在膜間質。以上轉運機制是高度保守的轉運系統缺陷可導致人體疾病線粒體外膜和內膜蛋白的轉運機制現在不清楚（二）細胞核蛋白質的定位細胞核蛋白在胞液合成後，通過核孔複合物輸入核內。靶向輸送的核蛋白多肽鏈內含有特異的信號序列，稱為核定位序列NLS（nuclearlocalizationsignal）。NLS可位於肽鏈的不同部位，在蛋白質進入核定位後不被切除。NLS為4—8個氨基酸殘基的短序列，富含帶正電荷的賴、精氨酸或脯氨酸，不同NLS間未發現共有序列。該序列是在SV40中的T抗原上發現的。快速疏水垮塌模型擴散-碰撞-締合模型動力學模型三、蛋白質折疊受內在因素外部條件制約1、氨基酸側鏈疏水性氨基酸殘基：疏水核親水性氨基酸殘基：氫鍵2、二硫鍵形成是蛋白質折疊的限速步驟脯氨酸順反異構化是抑制蛋白質折疊的潛在因素3、α-螺旋形成的起始階段是個慢過程4、單個結構域獨立折疊（一）內在因素：氨基酸側鏈和肽鏈的二級結構（二）外部條件：細胞內的特殊環境細胞內的大分子擁擠效應溫度和PH影響帶電狀態金屬離子的配位效應金屬配位鍵體外蛋白質折疊與細胞內新生肽鏈折疊的差別四、蛋白質折疊需要其他輔助因數蛋白質在體內的折疊相當迅速，如果不迅速折疊，蛋白質分子會被降解，或者形成無活性的聚集體。蛋白質肽鏈折疊可能是與翻譯過程同時進行，也可能多肽鏈翻譯過程結束之後。最近研究表明:在原核細胞中，折疊似乎是在翻譯完成之後再進行的；而在真核細胞中，折疊似乎是與翻譯同步進行的。分子伴侶蛋白幫助正確折疊成中間折疊體，阻止和糾正不正確折疊折疊酶催化與折疊直接有關的化學反應分子內分子伴侶蛋白質分子內部的前導肽細胞中大多數天然蛋白質折疊都不是自動完成，而需要其他酶、蛋白輔助---即分子伴侶（chaperone）。分子伴侶的作用是可逆地與未折疊肽段的疏水部分結合隨後鬆開，如此重複進行可防止錯誤的聚集發生，使肽鏈正確折疊。也可與錯誤聚集的肽段結合，使之解聚後，再誘導其正確折疊。也促進二硫鍵的正確形成。（一）分子伴侶蛋白—最主要的輔助因數大量的研究表明很多在脅迫條件（如熱激或缺氧等）下被誘導產生的所謂“脅迫誘導蛋白(stress-inducedproteins)”或“熱休克蛋白(heatshockproteins,簡寫為HSP”都具有分子伴侶活性。核質素觸發因數（triggerfactor，TF）內質網中的(calnexin、Bip、Grp94）定義：分子伴侶是指一類在序列上沒有相關性但有共同功能的蛋白質，它們在細胞內幫助其他含多肽的結構完成正確的組裝，而且在組裝完畢後與之分離，不構成這些蛋白質結構執行功能時的組份，分子伴侶本身不包括控制正確折疊所需的構象資訊，但是能阻止非天然態多肽鏈的錯誤折疊或凝集，給處在折疊中間體的多肽鏈提供更多正確折疊的機會。1、熱激蛋白HSP70和HSP40以ATP依賴方式參與折疊大腸桿菌中同源蛋白DnaK,需要輔伴侶（DnaJ、GrpE）生物學功能：依賴於ATP的方式結合和釋放非天然構象多肽的疏水片段，並能通過遮蔽這些片段而穩定蛋白質的鬆弛構象和阻止聚集。蛋白的跨膜運輸：多肽鏈在跨膜運輸前通常處於鬆弛構象狀態，當多肽的前導鏈通過蛋白質通道進入線粒體內腔時，基質中的