食品安全大肠菌群计数.pptx

中华人民共和国国家标准

GB4789.3—2016

食品安全国家标准

食品微生物学检验大肠菌群计数

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局

2016-12-23发布

2017-06-23实施

发布

本标准代替GB4789.3—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》、GB/T4789.32—2002《食品卫生微生物学检验大肠菌群的快速检测》和SN/T0169—2010《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数部分。

本标准与GB4789.3—2010相比,主要变化如下:

—增加了检验原理;

—修改了适用范围;

—修改了典型菌落的形态描述;

—修改了第二法平板菌落数的选择;

—修改了第二法证实试验;

—修改了第二法平板计数的报告。

前言

GB4789.3—2016

Ⅰ

1范围

本标准规定了食品中大肠菌群(Coliforms)计数的方法。

本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数;第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。

2术语和定义

2.1

大肠菌群Coliforms

在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

2.2

最可能数Mostprobablenumber;MPN

基于泊松分布的一种间接计数方法。

3检验原理

3.1MPN法

MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。

3.2平板计数法

大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸,在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色,带有或不带有沉淀环的菌落。

4设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:

4.1恒温培养箱:36℃±1℃。

4.2冰箱:2℃5℃。

4.3恒温水浴箱:46℃±1℃。

4.4天平:感量0.1g。

4.5均质器。

4.6振荡器。

4.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。

4.8无菌锥形瓶:容量500mL。

4.9无菌培养皿:直径90mm。

食品安全国家标准

食品微生物学检验大肠菌群计数

GB4789.3—2016

1

GB4789.3—2016

4.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。

4.11菌落计数器。

5培养基和试剂

5.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨(laurylsulfatetryptose,LST)肉汤:见A.1。

5.2煌绿乳糖胆盐(briliantgrenlactosebile,BGLB)肉汤:见A.2。

5.3结晶紫中性红胆盐琼脂(violetredbileagar,VRBA):见A.3。

5.4无菌磷酸盐缓冲液:见A.4。

5.5无菌生理盐水:见A.5。

5.61mol/LNaOH溶液:见A.6。

5.71mol/LHCl溶液:见A.7。

第一法大肠菌群MPN计数法

6检验程序

大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。

图1大肠菌群MPN计数法检验程序

2

GB4789.3—2016

7操作步骤

7.1样品的稀释

7.1.1固体和半固体样品:称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

7.1.2液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。

7.1.3样品匀液的pH应在6.5~7.5之间,必要时分别用1mol/LNa