食品安全大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定.pptx

食品安全国家标准

大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定

中华人民共和国国家标准

GB5009.224—2016

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

2016-08-31发布

2017-03-01实施

发布

GB5009.224—2016

前言

本标准代替GB/T21498—2008《大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定》。

本标准与GB/T21498—2008相比,主要变化如下:

—标准名称修改为“食品安全国家标准大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定”;—删除了原标准范围中“胰蛋白酶抑制剂活性可以用来表示豆制品的烘烤程度”;—修改了“原理”;

—修改了“试剂和材料”;

—删除了“采样”;

—修改了“试样制备”;

—删除了“测定次数”;

—修改了“结果计算”;

—修改了“精密度”;

—删除了“检验报告”;

—删除了附录B。

Ⅰ

1范围

本标准规定了大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)的测定方法。

本标准适用于大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定。

2原理

胰蛋白酶可与苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺(L-BAPA)发生反应,生成对硝基苯胺,该物质在410nm下有特征吸收。大豆制品中的胰蛋白酶抑制剂可抑制此反应,使吸光度值下降,其下降程度与胰蛋白酶抑制活性成正比。采用分光光度计在410nm处测定该反应前后的吸光度值,可定量分析胰蛋白酶抑制剂活性。

3试剂和材料

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。

3.1试剂

3.1.1盐酸(HCl)。

3.1.2冰乙酸(CH3COOH)。

3.1.3氢氧化钠(NaOH)。

3.1.4氯化钙(CaCl2·2H2O)。

3.1.5胰蛋白酶(Trypsin):-20℃冻藏。

3.1.6苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺(L-BAPA)。

3.1.7三羟甲基氨基甲烷[NH2C(CH2OH)3,Tris]。

3.1.8二甲亚砜(C2H6OS,DMOS)。

3.2试剂配制

3.2.1盐酸溶液(6mol/L):取50mL盐酸(3.1.1)加入水中,用水稀释至100mL,混匀。

3.2.2盐酸溶液(1mol/L):取83mL盐酸(3.1.1)加入水中,用水稀释至1000mL,混匀。

3.2.3盐酸溶液(0.1mol/L):取8.3mL盐酸(3.1.1)加入水中,用水稀释至1000mL,混匀。

3.2.4盐酸溶液(0.001mol/L):取1mL1mol/L盐酸溶液加入水中,用水稀释至1000mL,混匀。

3.2.5乙酸溶液(5.3mol/L):取30mL冰乙酸(3.1.2)加入水中,用水稀释至100mL,混匀。

3.2.6氢氧化钠溶液(0.01mol/L):称取0.40g氢氧化钠(3.1.3),溶于500mL水中,用水稀释至1000mL。

3.2.7氯化钙盐酸溶液:称取0.735g氯化钙(3.1.4)溶解于1L0.001mol/L盐酸溶液中,用1mol/L盐酸溶液和0.1mol/L盐酸溶液调节pH至3.0±0.1。

食品安全国家标准

大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定

GB5009.224—2016

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GB5009.224—2016

3.2.8胰蛋白酶储备液(0.270mg/mL):将胰蛋白酶(3.1.5)放置至室温,称取胰蛋白酶27.0mg于小烧杯中,用氯化钙盐酸溶液(3.2.7)溶解,转移至100mL容量瓶中,以氯化钙盐酸溶液(3.2.7)定容至刻度。保存于0℃~4℃冰箱中,最多可使用5d。

3.2.9胰蛋白酶使用液(0.0135mg/mL):用移液管量取5.0mL胰蛋白酶储备液(3.2.8)于100mL容量瓶中,用氯化钙盐酸溶液(3.2.7)定容至刻度。

3.2.10