食品安全克罗诺杆菌检验.pptx

中华人民共和国国家标准

GB4789.40—2024

食品安全国家标准

食品微生物学检验克罗诺杆菌检验

中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局

2024-02-08发布

2024-08-08实施

发布

本标准代替GB4789.40—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验杆菌)检验》。

本标准与GB4789.40—2016相比,主要变化如下:

—修改了标准名称;

—标准适用范围增加了婴幼儿辅助食品;

—增加了PCR鉴定方法作为选做内容;

—删除了挑取黄色菌落和生化鉴定中的产黄色素和苦杏仁苷项目;

—修改了培养基和试剂pH调节方法;

—修改了预热、选择性增菌温度以及TSA平板的培养温度和时间;

—修改了生化反应的培养温度及氨基酸培养基的制备。

克罗诺杆菌属(阪崎肠

前言

GB4789.40—2024

Ⅰ

1范围

本标准规定了食品中克罗诺杆菌(Cronobacterspp.)的检验方法。

本标准适用于婴幼儿配方食品、婴幼儿辅助食品、乳及乳制品及其原料中克罗诺杆菌的检验。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下。

2.1恒温培养箱:36℃±1℃,41.5℃±1℃。

2.2冰箱:2℃~5℃,-20℃。

2.3恒温水浴箱:41.5℃±1℃。

2.4天平:感量0.1g、0.01g。

2.5振荡器。

2.6无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。

2.7无菌容器:容量100mL、200mL、2000mL。

2.8无菌培养皿:直径90mm。

2.9pH计或pH比色管或精密pH试纸。

2.10微生物生化鉴定系统。

2.11PCR仪。

2.12离心机:转速≥12000r/min。

2.13凝胶成像系统或紫外检测仪。

2.14琼脂糖水平电泳仪或毛细管电泳仪。

2.15PCR反应管。

2.161.5mL离心管。

2.1710μL接种环。

3培养基和试剂

3.1缓冲蛋白胨水(buferedpeptonewater,BPW):见A.1。

3.2改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(modifiedlaurylsulfatetryptosebroth-vancomycinmedium,mLST-Vm):见A.2。

3.3克罗诺杆菌显色培养基。

3.4胰蛋白胨大豆琼脂(trypticasesoyagar,TSA):见A.3。

3.5生化鉴定试剂盒。

3.6氧化酶试剂:见A.4。

3.7L-赖氨酸脱羧酶培养基:见A.5。

食品安全国家标准

食品微生物学检验克罗诺杆菌检验

GB4789.40—2024

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3.8L-鸟氨酸脱羧酶培养基:见A.6。

3.9L-精氨酸双水解酶培养基:见A.7。

3.10糖类发酵培养基:见A.8。

3.11西蒙氏柠檬酸盐培养基:见A.9。

3.12内转录间隔区(its)PCR引物见表1,基因扩增靶标参考序列见附录B。

3.135U/μL耐热DNA聚合酶。

3.142.5mmol/dNTPs:dATP、dTTP、dCTP、dGTP。

3.1525mmol/LMgCl2。

3.1610×PCR缓冲液:见A.10。

3.17克罗诺杆菌质控菌株:具有菌种保藏资质单位提供的ATCC29544或等效菌株。

3.18大肠埃希氏菌质控菌株:具有菌种保藏资质单位提供的ATCC25922或等效菌株。

3.19DNA提取试剂:细菌基因组DNA提取试剂盒。

3.20商品化PCR反应预混液。

3.21标准(高熔点)琼脂糖:分析纯。

3.22核酸染色剂。

3.23分子质量标准:100bpDNAladder。

3.2450×TAE电泳缓冲液:见A.11。

3.256×DNA加样缓冲液:见A.12。

第一法克罗诺杆菌定性检验

克罗诺杆菌检验程序见图1。

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