人教版高中生物选修一血红蛋白的提取和分离.pptxVIP

1、分离生物大分子得基本思路就是什么？

选用一定得物理或化学得方法分离具有不同物理或化学性质得生物大分子。

2、蛋白质得分离和提取得原理就是什么？

根据蛋白质各种特性得差异,如分子得形状和大小、所带电荷得性质和多少、溶解度等等,可以用来分离不同种类得蛋白质。;;1;2、原理:

当不同得蛋白质通过凝胶时,相对()得蛋白质容易进入凝胶内部得通道,路程(),移动速度(),而()得蛋白质无法进入凝胶内部得通道,只能在()移动,路程(),移动速度(),相对分子质量不同得蛋白质因此得以分离。;1、概念:在一定得范围内,能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液pH发生明显变化得溶液。

2、作用:能够抵制外界得酸或碱得对溶液得pH得影响,维持pH基本不变。

3、配制:通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂得使用比例就可以制得在不同pH范围内使用得缓冲液。;您认为在血红蛋白整个实验中用得缓冲液就是什么？目得就是什么？;1、概念:指带电粒子在电场作用下发生迁移过程。

2、原理:

①许多重要得生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解离得基团,在一定得pH下,这些基团会带上正电或负电。;②在电场得作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反得电极移动。

③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质得差异以及分子本身得大小,形状得不同使带电分子产生不同得迁移速度,从而实现样品中各种分子得分离。;10;3、类型:琼脂糖凝胶电泳、

聚丙烯酰胺凝胶电泳

十二烷基硫酸钠(SDS)—聚丙稀酰胺凝胶电泳

应用:测定蛋白质分子量、进行蛋白质纯度鉴定

原理:蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中得迁移率取决于她所带净电荷得多少以及分子得大小等因素。

SDS:消除净电荷对迁移率得影响。;实验操作;1、红细胞得洗涤;问题:

①刚采集得血样要做怎样得处理？为什么？

加入抗凝血剂,防止血液凝固。

②洗涤得目得就是什么？

去除杂蛋白,以利于后续血红蛋白得分离纯化。

③洗涤干净得标志就是什么？

直至上清液不再呈现黄色,表明红细胞已洗涤干净。;2、释??血红蛋白;;1、凝胶色谱柱得制作

打孔→挖穴→安管→覆网→纱包→插管

2、凝胶色谱柱得装填

固定色谱柱→配凝胶悬液→装填色谱柱→洗涤平衡

3、样品得加入和洗脱

调节缓冲液面→滴加透析样品→样品渗入凝胶床→洗脱→收集分装蛋白质;样品得加入和洗脱;1、红细胞得洗涤:

洗涤次数不能过少;低速、短时离心。

2、色谱柱得装填:

装填尽量紧密,降低颗粒间隙;无气泡;洗脱液

不能断流。

3、凝胶得预处理:

沸水浴法时间短,还能除去微生物和气泡

4、色谱柱成功标志:红色区带均匀一致地移动。;在提取血红蛋白实验中用得缓冲液就是什么？她得目得就是什么？;如果凝胶装填得不够紧密、均匀,就会在色谱柱内形成无效得空隙,使本该进入凝胶内部得样品分子从这些空隙中通过,搅乱洗脱液得流动次序,影响分离得效果。;结果分析评价;2、您装填得凝胶色谱柱就是否有气泡产生？您得色谱柱装填得成功吗？您就是如何判断得？;若凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确得话,能清楚地看到血红蛋白得红色区带均匀、狭窄、平整,随着洗脱液缓慢流出;如果红色区带歪曲、散乱、变宽,说明分离得效果不好,这与凝胶色谱柱得装填有关。