大白菜SOC1b基因参与花期调控的功能及分子作用机制.pdfVIP

摘要

大白菜（Brassicarapassp.pekinensis），属于十字花科（Cruciferae）芸薹属（Brassica）

植物。大白菜富含多种营养成分，如维生素、纤维素、碳水化合物等，是我国最畅销的

蔬菜之一。随着人们对大白菜的需求不断增加，大白菜由原来的秋播到一年四季栽培，

但是在实际栽培种植过程中由于气候不同使得大白菜易出现早期抽薹开花。一旦出现早

抽薹的现象，便会很大程度上影响产品器官的产量与品质。依据拟南芥的分类，研究者

对大白菜MADS家族的分类，有16个基因与拟南芥SOC1基因在一个分类中，然而目

前在甘蓝中发现大白菜SOC1a（BrSOC1a，GeneID：Bra000393）基因促进植株开花，

与其同源关系最近的基因BrSOC1b（GeneID：Bra004928）是否参与花期调控及相互作

用关系并不清楚。因此，本试验研究BrSOC1b对花期的影响，同时对其分子作用机制做

进一步探索。首先对SOC1b（BrSOC1b，基因ID：Bra004928）基因的开放阅读框进行

克隆，并分析其结构和系统进化关系。此外，利用载体构建、转基因、病毒诱导基因沉

默、酵母双杂交等多种技术研究BrSOC1b基因参与花期调控的功能及其与相关蛋白的

互作关系。具体研究结果如下：

1BrSOC1b基因的表达模式分析。

通过克隆BrSOC1b基因的阅读框序列，显示含有642bp，编码213个氨基酸。系

统发育树和保守结构域分析结果显示BrSOC1b与芥菜SOC1b的同源关系最近，且含有

MADS-box、K-box和SOC1典型结构域。亚细胞定位结果表明BrSOC1b定位在细胞核

和质膜上。BrSOC1b在幼苗期和结荚初期的组织表达模式分析显示BrSOC1b在幼苗期

茎中部位表达量最高，在结荚初期的花中表达量最高，因此推测BrSOC1b具有时空特

异性且在花的发育方面可能起关键作用。

2BrSOC1b基因参与大白菜开花时间的功能及路径分析。

通过载体构建和遗传转化获取BrSOC1b-异源表达拟南芥植株，在此基础上对转基

因和野生型植株表型、抽薹时间和开花时间分析，结果发现BrSOC1b-过表达拟南芥植

株的抽薹时间相对野生型植株提早7-11天，开花时间相对野生型植株提早6-7天。利用

病毒诱导基因沉默（VIGS）的方法对Brsoc1b进行基因沉默，研究结果表明Brsoc1b部

分沉默抑制大白菜抽薹和开花。基于以上分析推测BrSOC1b在大白菜的花期调控中发

挥重要作用。

通过对BrSOC1b-过表达拟南芥植株进行光周期处理，结果发现长日照促使

BrSOC1b-过表达拟南芥植株提前抽薹4-5天，提前开花6-7天。利用qRT-PCR技术测

定发现BrSOC1b基因呈现昼夜规律。此外，外源赤霉素处理能促进转基因拟南芥

BrSOC1b过表达植株早开花，同时使其叶片膨大和茎伸长。基于以上分析BrSOC1b可

能通过光周期路径和赤霉素路径促使大白菜抽薹和开花。

3大白菜SOC1b互作蛋白的预测和验证。

本研究以BrSOC1b作为诱饵蛋白，利用STRING在线工具预测到5个促进植株开

花的BrSOC1b的靶蛋白（BrAGL9a、BrAGL9b、BrAGL2、BrAGL8和BrAP1），在此

基础上利用酵母双杂交技术作进一步证明。利用qRT-PCR技术测定以上5个基因在

pTY-Brsoc1b和对照植株中的表达水平，结果发现当Brsoc1b基因部分沉默时，除了

BrAP1基因显著上调，BrAGL9a、BrAGL9b、BrAGL2、BrAGL8基因都显著下调，因此

结果表明BrSOC1b可能通过作用于BrAGL9a、BrAGL9b、BrAGL2、BrAGL8蛋白从而

参与花期调控。

关键词：大白菜，SOC1b，花期调控，酵母双杂交，转基因植株，基因沉默