核酸与核苷类药物概述及合成工艺.pptVIP

四、核苷的制备核苷是多种核苷类药物的原料，在核酸类药物中占主导地位。（1）以核苷及其结构类似物、衍生物为主药物多达几十种；（2）核苷类药物在抗病毒、抗肿瘤、增强免疫方面占重要地位；（3）核苷的发酵水平大大高于核苷酸，所以常做后者的前体物质。1、RNA化学水解法制备核苷：第31页，共65页，星期日，2025年，2月5日第32页，共65页，星期日，2025年，2月5日2、发酵法生产核苷产率高、周期短、控制容易、产量大。共同特点：（1）使用磷酸单酯酶活力很强的枯草芽孢杆菌或短小芽孢杆菌为诱变出发菌株；（2）具有特定标记的有变株；（3）发酵培养时需提供限量生长因素。原菌株：（1）AMP强烈抑制PRPP转酰胺酶的活性，控制总代谢途径；（2）AMP抑制SAMP合成酶；（3）GMP抑制IMP脱氢酶第33页，共65页，星期日，2025年，2月5日第34页，共65页，星期日，2025年，2月5日生产菌株：（1）酶6、7缺失（为腺嘌呤缺陷型）积累IMP---肌苷（肝炎辅助药）；（2）酶4缺失（为鸟嘌呤缺陷型）积累XMP---黄苷；（3）酶5缺失积累鸟苷。第35页，共65页，星期日，2025年，2月5日发酵法生产肌苷（1）肌苷生产工艺（2）发酵工艺条件：碳源为葡萄糖保证充足的氮源磷酸盐的影响Mg+、Ca+有促进作用生长因子腺嘌呤或酵母粉要亚适量最适发酵温度为30--34℃，pH6.0—6.2需大风量,高溶氧和低CO2第36页，共65页，星期日，2025年，2月5日发酵法生产肌酐的工艺流程第37页，共65页，星期日，2025年，2月5日发酵法生产鸟苷和黄苷鸟苷产生菌的特征：（1）嘌呤核苷酸分解酶活力强；（2）SAMP合成酶，GMP还原酶缺失；（3）解除AMP、GMP对PRPP转酰胺酶，肌苷酸脱氢酶和GMP合成酶的反馈抑制；第38页，共65页，星期日，2025年，2月5日第39页，共65页，星期日，2025年，2月5日发酵法生产腺苷以肌苷生产菌（枯草杆菌）为诱变基础菌株。诱变结果：（1）腺嘌呤回复，腺嘌呤酶缺失；（2）黄嘌呤缺陷型，GMP还原酶缺失；（3）抗8杂氮黄嘌呤解除对PRPP转酰胺酶的抑制；（4）发酵不稳定的原因：黄嘌呤缺陷及腺嘌呤酶缺失与回复（菌种传代中）。第40页，共65页，星期日，2025年，2月5日第三节核酸与核苷类药物的制备举例第41页，共65页，星期日，2025年，2月5日（一）叠氮胸苷（Azidothymidine，AZT）1、结构与性质AZT是1987美国FDA批准的治疗艾滋病的新药。AZT的药理作用是人体内经磷酸化后生成了3`-叠氮-2′-脱氧胸腺嘧啶核苷酸，后者取代了正常的胸腺嘧啶核苷酸参与病毒DNA的合成，含有AZT成份的DNA不能继续复制，从而达到阻止病毒增殖的目的。2、生产工艺此合成路线的起始原料是胸苷，目前主要是从DNA水解法制备，由于原料来源少，合成路线较复杂，成本很高。第42页，共65页，星期日，2025年，2月5日已见报道的胸苷合成方法还有两条途径：①从2′-脱氧胞苷或2′-脱氧鸟苷或2＇-脱氧腺苷与胸腺嘧啶反应，经大肠杆菌产生的磷酸化酶催化生成胸苷。②从鸟苷（300mmol／L）与胸腺嘧啶（300mmol／L）反应，在欧文氏菌AJZ992所产生的嘌呤核苷磷酸化酶和嘧啶核苷磷酸化酶的催化下生成5′-甲基尿苷，然后经化学法合成胸苷。第43页，共65页，星期日，2025年，2月5日第44页，共65页，星期日，2025年，2月5日（二）阿糖腺苷（Adeninearabinoside）1、结构与性质阿糖腺苷的化学名称为9-β-D-阿拉伯呋喃糖腺嘌呤，或称腺嘌呤阿拉伯糖苷。早在1960年就在实验室合成了阿糖腺苷，1969年美国用StreptomycesantibioticusNRRL3238菌株，1972年日本用Strepto－myceshebacecus4334菌株发酵法分别制备了阿糖腺苷。1979年用从E．Coli中分离得到的尿嘧啶磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶，以固相酶的方法将阿糖脲苷转化为阿糖腺苷。第45页，共65页，星期日，2025年，2月5日2、生产工艺酶-化学合成法最新的阿糖腺苷的合成法是酶-化学合成法：用尿苷为原料经氧氯化磷和二甲基甲酰胺反应，生成氧桥化合物，在碱性水溶液中水解成阿糖尿苷，然后利用阿糖尿苷中的阿拉伯糖经酶法转化成阿糖腺苷。