3.2基因工程的基本操作程序第1课时课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第三章第2节基因工程的基本操作程序

复习回顾限制酶DNA连接酶载体基因工程的基本工具磷酸二酯键特点：作用部位：具有专一性结果：形成黏性末端或平末端连接部位：磷酸二酯键种类：E.coliDNA连接酶、T4DNA连接酶作为载体的条件种类：①有一个至多个限制酶切割位点；②有特殊的标记基因；③能自我复制或能整合到宿主DNA上。质粒、病毒

任务一：说出基因工程的操作水平、操作对象。操作水平：分子水平操作对象：基因（DNA）结合转基因抗虫棉案例回答以下问题：（1）转基因抗虫棉的目的基因是：（2）转基因抗虫棉的受体细胞是：抗虫基因—苏云金杆菌的Bt基因棉花植株细胞1.目的基因：用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。（P76第2段）主要指的是编码蛋白质的基因。第2节基因工程的基本操作程序

结合转基因抗虫棉案例回答以下问题：（3）结合转基因抗虫棉案例概括“基因工程的操作程序”：抗虫棉

（有抗虫特性）普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞导入与载体(质粒)拼接重组DNA分子一、目的基因的筛选与获取二、基因表达载体的构建三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定获得抗虫基因Bt基因（核心）第2节基因工程的基本操作程序

二2、目的基因的筛选：思考1：自然界中抗虫基因种类多如：Bt基因、蛋白酶抑制基因、凝集素基因等，如何选择合适的基因？（1）从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选掌握了Bt基因的序列信息用苏云金杆菌制成的生物杀虫剂，广泛用于防治棉花虫害已有多年历史。Bt基因的表达产物--Bt抗虫蛋白破坏鳞翅目昆虫的消化系统。(P77相关信息栏）苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因第一步、目的基因的筛选与获取

DNA测序仪明确了目的基因后，该怎么获得它?序列数据库（如GenBank）核苷酸序列比对氨基酸序列比对序列比对工具（如BLAST）(2)认识基因结构和功能的技术方法：2、目的基因的筛选：二测序技术测定核酸和蛋白质序列第一步、目的基因的筛选与获取

(1).通过化学方法直接人工合成目的基因获取目的基因的方法DNA合成仪要求：①基因比较小②核苷酸序列已知的基因(2).通过构建基因文库获取目的基因基因文库种类：①基因组文库（包含一种生物的所有基因）②部分基因文库（只包含一种生物的部分基因，如cDNA文库）第一步、目的基因的筛选与获取

拓展：基因文库的构建过程某生物体全部DNA许多DNA片段受体菌群体限制酶与载体连接、导入受体菌群体cDNA某生物体发育的某个时期的mRNA逆转录与载体连接、导入基因组文库cDNA文库第一步、目的基因的筛选与获取

PCR——聚合酶链式反应（3）利用PCR获取和扩增目的基因3、目的基因的获取PCR由穆里斯等人于1985年发明，为此，穆里斯于1993年获得诺贝尔化学奖。根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。二第一步、目的基因的筛选与获取

【重温】DNA体内复制的过程及条件合成子链解旋形成新DNA条件在DNA复制中的作用DNA模板链4种脱氧核苷酸解旋酶DNA聚合酶引物提供DNA复制的模板合成DNA子链的原料打开DNA双链催化合成DNA子链使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸任务二：说出“DNA体内复制”需要满足的条件:

二任务三：思考与探究—引物：1.为什么需要设计引物？引物设计时是否需要知道整个目的基因的碱基序列？2.要保证DNA的两条链同时被扩增，至少现需要几种引物？3.由于DNA的两条链是反向平行的，新链合成的方向是5’端向3’端延伸，引物的结合位置是（）3’5’DNA母链13’5’DNA母链23’5’DNA母链13’5’DNA母链2①④③②②③DNA聚合酶不能从头合成DNA，只能从引物的3′端开始延伸DNA链2种用于PCR的引物通常长度为20~30个核苷酸的DNA单链。体内的DNA复制通常以RNA单链为引物。P77“相关信息栏”第一步、目的基因的筛选与获取只需要知道目的基因两侧的核苷酸序列即可

任务三：思考与探究：4.请你为Bt基因设计合适的引物。Bt基因CT???GGT-5’引物1引物25-TCC???AA①②①②二第一步、目的基因的筛选与获取

小结：1.结合体内DNA复制过程，思考PCR的进行需要哪些条件？体内DNA复制在DNA复制中的作用PCR中参与的组分和条件打开DNA双链提供DNA复制的模板合成子链的原料催化合成DNA子链使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸4种脱氧核苷酸引物（通常为小的单链RNA）DNA