3.2基因工程的基本操作程序第2课时课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

第1课时目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建1、简述PCR的原理、条件及过程(重点)。2、简述基因表达载体的组成及构建过程(重、难点)。学习目标第3章第2节基因工程的基本操作程序

三、将目的基因导入受体细胞

基因表达载体导入植物细胞动物细胞微生物细胞构建好的基因表达载体需要通过一定的方式才能进入受体细胞。

—1.将目的基因导入植物细胞（1）花粉管通道法（我国科学家独创）①受体细胞：受精卵/体细胞萌发的花粉管柱头花柱子房胚囊卵细胞

（1）花粉管通道法（我国科学家独创）①受体细胞：受精卵植物经过开花和传粉之后，花粉飘落在雌蕊的柱头上，花粉受到柱头分泌的黏液的刺激，就萌发出花粉管。花粉管沿着花柱向子房内生长。花粉管内有精子。当花粉管从珠孔进入胚珠后，其末端破裂，精子被释放出来，与卵细胞结合，成为受精卵。这样就完成了受精过程。萌发的花粉管柱头花柱子房胚珠卵细胞精子珠孔—1.将目的基因导入植物细胞

（1）花粉管通道法（我国科学家独创）②操作方式Ⅰ.用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中。含目的基因的DNA溶液外源DNA进入受精卵，并进行随机整合。子房—1.将目的基因导入植物细胞

（1）花粉管通道法（我国科学家独创）②操作方式Ⅱ.在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。花粉外源DNA花粉管子房胚珠胚囊—1.将目的基因导入植物细胞

花柱滴加优点①利用植物授粉后形成的天然花粉管通道，将外源基因携带进入胚囊，此时的受精卵未形成细胞壁，且正在进行活跃的DNA复制，容易将外源DNA片段整合到受体基因组中。②操作简单、技术成本低，免去了组织培养以及诱导再生植株的全套人工培养过程。

（2）农杆菌转化法①转化：是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，实质是基因重组。农杆菌是普遍存在于土壤中的一种微生物，它能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，并诱导产生冠瘿瘤等。—1.将目的基因导入植物细胞

科学研究发现，当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移至受体细胞染色体的DNA上。这种酚类化合物主要在双子叶植物细胞壁中合成，单子叶植物通常没有。为什么农杆菌容易感染双子叶植物？农杆菌Ti质粒T-DNA

（2）农杆菌转化法②农杆菌特点Ⅰ.在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。冠瘿瘤—1.将目的基因导入植物细胞Ⅱ.农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。T-DNATi质粒大型环状DNA农杆菌

将目的基因插入中，通过农杆菌的作用，就可以使目的因。③转化的原理Ti质粒的T-DNA转化进入植物细胞（2）农杆菌转化法—1.将目的基因导入植物细胞目的基因Ti质粒表达载体农杆菌植物细胞植物细胞染色体DNA新性状植株构建转入导入插入表达④转化过程

Ⅰ.两次拼接第一次拼接：目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上。第二次拼接：被插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。第1次拼接第2次拼接④转化过程（2）农杆菌转化法—1.将目的基因导入植物细胞

Ⅱ.两次导入第一次导入：将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌。第二次导入：含目的基因的T-DNA导入受体细胞。第1次导入第2次导入④转化过程（2）农杆菌转化法—1.将目的基因导入植物细胞

随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种单子叶植物也取得成功。

任务：分析将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定1.在用土壤农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，一定要将目的基因插入到Ti质粒的T－DNA上的原因是什么？原因是农杆菌中的Ti质粒上的T－DNA(可转移的DNA)可转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。2.基因表达载体中已经具备标记基因(如抗生素抗性基因)，对受体细胞进行了筛选，为什么基因工程的第四步还要对目的基因进行检测和鉴定？在含抗生素的选择培养基上能生长的是导入了载体的细胞(基因表达载体或者未插入目的基因的空载体)，以及仍然不知道目的基因插入的位置、方向等是否正确，能否正确表达。因此需要第四步来检测目的基因是否导入，并在转录、翻译和个体水平上进行检测和鉴定

3.如果目的基因是抗虫基因，在个体水平上怎么检测？如果目的基因是耐盐