分子生物学-课件.ppt

分子生物学-技术26、引物设计后以后，还需通过internet与人类基因组数据库比对，了解其特异性。分子生物学-技术2分子生物学-技术2分子生物学-技术2分子生物学-技术2分子生物学-技术2分子生物学-技术25’gaaaaagtcagaaatttatcctaaaaattctgcagaatcaaaaaccacaatgaccctcggggtttccacttggaaaattattacaaactgtatttttgcttatgagctttatattgcactgccctgaactgtgacctgttggagttgtttgcatctgaaggagtgcttaaaacccttttctccccagTTCCCAGAGGCACCGACATCACTAAACAGATTATAATTGGCTGATTTGACTAAGATTCGTGTGTTTGTCCTGGATGAAGCAGATGTGATGATTGACACTCAAGGATTCTCAGATCATAGTATTCGTATTCAAAGgtaatcttcagagtcttcctctcttcctcagccttctgtccagatggggaatttcatttgtttactcctccacattatctttattgcttaactcctcaccaccttcacctctaaaataaatttgagtttttacattattttcaccagttcaagggtccctcagactgct3’5’ctgtatttttgcttatgagctttatattgcactgccctgaactgtgacctgttggagttgtttgcatctgaaggagtgcttaaaacccttttctccccAgTTCCCAGAGGCACCGACATCACTAAACAGATTATAATTGGCTGATTTGACTAAGATTCGTGTGTTTGTCCTGGATGAAGCAGATGTGATGATTGACACTCAAGGATTCTCAGATCATAGTATTCGTATTCAAAGgtaatcttcagagtcttcctctcttcctcagccttctgtccagatggggaatttcatttgtttactcctccacattatctttattgcttaactcctcaccaccttcacc3’5’aaacccttttctccccagTTCCCAGAGGCACCGACATCACTAAACAGATTATAATTGGCTGATTTGACTAAGATTCGTGTGTTTGTCCTGGATGAAGCAGATGTGATGATTGACACTCAAGGATTCTCAGATCATAGTATTCGTATTCAAAGgtaatcttcagagtcttc3’(第一对引物扩增）(第二对引物扩增）分子生物学-技术2用于检测特定基因序列的存在或缺失。电泳引物分子生物学-技术2内对照123AZF区的缺失检测分子生物学-技术2已知序列未知序列未知序列限制酶限制酶连接酶分子生物学-技术2病毒1病毒2病毒3病毒4不同病毒的引物用不同颜色的荧光标记分子生物学-技术2标记引物ＰＣＲ观察PCR产物分子生物学-技术2分子生物学分子生物学-技术2第三节：聚合酶链反应（PCR）聚合酶链反应（polymerasechainreactionPCR）技术是KaryMullis发明的。它是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。在１９８５年的一次学术会议上，此方法首次被介绍，在分子生物科学家中也引起了链锁反应，大家很快地纷纷采用这个方法在短短的几年内，ＰＣＲ迅速成为分子生物学的一项常规手段，并得到了广泛的实际应用，被许多科学家视为近三十年来分子生物学领域最重要的一项技术突破。１９９３年，Mullis因此获得诺贝尔化学奖。分子生物学-技术2PCR主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成，通过变性，待扩增的靶DNA双链成为两条单链DNA模板；退火时,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最适温度下，以引物3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。这样，每一双链的DNA模板，经过一热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板.经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增109倍以上，实际上一般可达106～107倍。一、PCR的原理分子生物学-技术2二、PCR反应系统的组成引物酶dNTP模板Mg2+TaqDNA聚合酶Buffer(缓冲液)分子生物学-技术2（一）模板