T CAV 020—2025 人呼吸道合胞病毒中和抗体检测技术指南.pdfVIP

ICS07.100

CCSC10

CAVT/CAS

团体标准

T/CAV020—2025T/CAS1052—2025

人呼吸道合胞病毒中和抗体检测技术指南

Guidelinesfordetectionofneutralizingantibodytohumanrespiratorysyncytialvirus

2025-04-23发布2025-04-23实施

中国疫苗行业协会中国标准化协会联合发布

T/CAV020—2025T/CAS1052—2025

人呼吸道合胞病毒中和抗体检测技术指南

1范围

本文件规定了用于人呼吸道合胞病毒血清中和抗体测定的噬斑减少中和实验的操作流程及结果判

定标准。

本文件适用于人呼吸道合胞病毒中和抗体的定性检测和定量测定。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

中和抗体neutralizingantibody

可与病原微生物及其产物特异性结合并发挥中和作用的抗体。

噬斑plaque

当病毒感染一种敏感细胞时，增殖的病毒通过扩散感染邻近细胞，形成与噬菌斑相似的斑。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

FBS：胎牛血清（FetalBovineSerum）

HRSV：人呼吸道合胞病毒（HumanRespiratorySyncytialVirus）

HEp-2：人喉表皮样癌细胞（HumanLarynxEpidermoidCarcinomaCells）

HRP：辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase）

PRNT：噬斑减少中和实验（PlaqueReductionNeutralizationTest）

PBST：含0.05%吐温20的磷酸盐缓冲液（Phosphate-BufferedSalinewith0.05%Tween20）

PFU：噬斑形成单位（PlaqueFormingUnit）

5试剂材料

PBST：配制参照附录A.1。

青-链霉素：配制参照附录A.2。

维持液：配制参照附录A.3。

培养液：配制参照附录A.4。

覆盖物：配制参照附录A.5。

水：GB/T6682-2008，二级水。

固定液：4%多聚甲醛。

HRSV毒株：标准毒株或流行毒株。

HEp-2细胞

来源于ATCC，细胞代次控制在30代以内，定期检测细胞形态和活力，确保细胞生长状态及病毒感

染敏感性稳定。

一抗：单克隆抗体Palivizumab。

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二抗：HRP标记山羊抗人IgG。

TrueBlue显色液。

6器材和设备

96孔细胞培养板。

台式低速离心机。

CO2培养箱。

细胞计数器。

II级生物安全柜。

全自动洗板机。

恒温水浴箱。

分析天平。

微量移液器：单通道、多通道。

倒置显微镜。

酶联免疫斑点分析仪。

7实验操作

病毒培养

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