制备色谱技术原理及其在天然产物提取分离中的应用.docxVIP

摘??要：制备色谱技术是用于分离提取天然产物有效成分的一种重要技术。现简要综述了各类制备色谱技术的原理，介绍了各类制备色谱技术在天然产物提取分离中的应用情况。

关键词：制备色谱技术；应用；天然产物；原理

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0?引言

制备色谱技术发展至今已有100多年历史，其目的在于分离制备一种或者多种纯组分。从最早的常压柱色谱技术、薄层色谱技术，到后来发展起来的加压液相色谱技术、高速逆流色谱技术、模拟流动床色谱技术等，制备色谱技术已经成为现代科学研究和生产实践中分离多组分化合物的一个重要技术手段，尤其在自然界中天然产物活性成分的提取和纯化中起着重要作用。本文主要介绍几种重要的制备色谱技术的原理及其在天然产物分离纯化中的应用情况。

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1?制备色谱技术的原理

1.1?薄层色谱

薄层色谱技术属于液相色谱技术的范畴，经典的制备型薄层色谱设备简单，投资较少，但处理量较小，通常用来分离毫克级的样品，且被分离的化合物需要从薄层板上刮下，并将其从吸附剂中提取出来。薄层色谱中常用的是硅胶吸附色谱，其次是氧化铝吸附薄层色谱。

1.2?常压柱色谱

常压柱色谱应用较为广泛，技术也相对成熟，主要包括吸附柱色谱、分配柱色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱、干柱色谱等。其中，吸附柱色谱中的硅胶吸附柱色谱是目前应用最为广泛的一种常压柱色谱。

吸附柱色谱的技术原理是不同化合物由于分子结构不同，与吸附剂表面作用力的大小也不同，同一种冲洗溶剂对不同分子结构的化合物溶解度不同，致使冲洗溶剂在冲洗时，不同化合物组分在色谱柱中的流动速度不同，从而将复杂混合物分离。

1.3?加压制备色谱

加压制备色谱技术是一种使用较为广泛的色谱分离纯化技术，它是将分离填料填装在色谱柱内，用液体流动相进行洗脱，利用药物中不同活性成分与填料相互作用力的差异来分离混合物。一般将压力0.2MPa左右的称为快速色谱；压力低于0.5MPa的称为低压制备色谱；压力在0.5～2MPa的称为中压制备色谱；压力大于2MPa的称为高压制备色谱，也叫高效液相色谱。制备型加压液相色谱分离的关键部位是色谱柱，色谱柱的大小取决于待分离样品量的多少。

快速色谱技术操作非常简便，常用于简单的物质分离。它与柱色谱类似，但比柱色谱多了一个加压装置，可缩短分离操作时间，填料颗粒较大，因此分辨率较低。快速色谱中使用最广泛的固定相是硅胶。

低压液相色谱（LPLC）比快速色谱稍微复杂点，填料颗粒较小一些，分辨率也稍高。低压制备色谱的加压手段一般有空气泵加压、双链球加压、氮气钢瓶加压、蠕动泵加压等。

中压制备色谱（MPLC）可承载更大的样品量，色谱柱也较长较大，需要的压力比低压液相色谱更大，同时它的分辨率也更高，分离时间更短。其工作原理是由恒流泵输送移动相，通过进样阀上样，在色谱柱对样品进行分离后，利用检测器检测，计算机记录、处理、打印数据，同时收集各个馏分。

高压液相色谱（HPLC）一般色谱柱较短，内径较大，填料颗粒更细，具有高柱效、高流速、高分离速度的特点，可制备纯化难分离的物质，通常作为分离纯化操作的最后一步。高效液相色谱的压力较大，普通玻璃柱易破裂，一般选用不锈钢材料做色谱柱。

1.4?高速逆流色谱

高速逆流色谱（HSCCC）是逆流色谱中最具实用意义的一类，高速逆流色谱分离柱的固定相无载体，消除了载体对分离过程的影响，适合分离极性物质和具有生物活性的物质，且高速逆流色谱超载能力强，进样量大，尤其适用于制备性分离，同时具有高回收率。高速逆流色谱仪主要由恒流泵、进样阀、主机、检测器、色谱工作站和馏分收集器组成。

高速逆流色谱工作时，需要不互溶的两相液体，一种作为固定相，另一种作为流动相。它是根据单向性流体动力平衡原理分离不同物质的，在主机的线圈一端注入固定相，进样后，恒流泵压入流动相载着样品进入线圈，线圈高速转动，两相就有相对运动之势，恒流泵的单向阀使得固定相无法逆向流出，流动相却不断流入穿过固定相，样品就会在两相中无限次分配，最终由于样品组分分配系数不同而被分离。高速逆流色谱仪转速越快，固定相保留越多，分离效果就越好。

1.5?模拟移动床色谱

模拟移动床色谱（SMB）技术首先应用于石油化学工业。通常的色谱分离技术存在间歇性生产、操作费用高等缺点，而模拟移动床色谱技术具有操作连续化、流动相耗量少等优点，因此该技术逐渐受到重视。与普通色谱技术相比，模拟移动床色谱技术具有操作自动化、制备效率高、制备量大等优点，常用来分离手性物质，但其设备复杂，使用和维护困难，优化提纯的条件也较为复杂，所得到的产品液的浓度低于进料液的浓度，且模拟移动床色谱仪是一种二元分离器，应用范围较窄。

模拟移动床色谱仪的固定相不随床层移动，而是通过物料进出口随流动相流动方向移动，实现固定相与流动相的逆流。根据液流流速和所起作用的不同，把整个床层分为4个